脂质体转染Kv1．5反义寡核苷酸（AsOND）对人气道平滑肌Kv活性的影响.pdfVIP

维普资讯 ChineseJournalofPathophysiology !!垫()； = 1Q [文章编号] 1000-4718(2007)02—0266—05 脂质体转染 Kv1．5反义寡核苷酸 (AsOND)对 人气道平滑肌 Kv活性的影响木 程东军， 徐永健 ， 刘先胜， 熊盛道 ， 张珍祥 (华中科技大学同济医学院附属同济医院呼吸内科 ，湖北 武汉 430030) [摘 要] 目的：研究人气道平滑肌细胞 (HASMCs)转染 Kv1．5反义寡核苷酸(AsOND)后，电压依赖延迟整 流钾通道 (Kv)的活性变化，探讨其基因亚型Kv1．5在调节Kv活性中的作用。方法：采用脂质体转染、逆转录聚合 酶链反应 (RT—PCR)、Westernblotting和全细胞膜片钳技术，观察转染 Kv1．5AsOND后，HASMCsKv1．5mRNA及 蛋白表达的变化，以及转染对 HASMCsKv活性的影响。结果：脂质体转染 Kv1．5AsOND后 ，HASM细胞 Kv1．5 mRNA和蛋白质的表达均下降；Kv电流值受到显著抑制；使细胞膜电位 (E )趋 向于去极化方向。结论 ：转染 Kv1．5AsOND可导致HASMCsKv功能降低，Kv1．5基因亚型在调节Kv活性中可能起重要作用。 [关键词] 钾通道；气道平滑肌细胞 ；寡核苷酸类，反义；转染 [中图分类号] R363 [文献标识码] A Effectofliposome—mediatedtransfectionOfKv1．5antisenseoligonucle． otidesonactivityOfKvinairwaysmoothmusclecells 一 一 CHENGDong—jun，XUYong—jian，LIUXian—sheng，XIONGSheng—dao，ZHANG Zhen——xiang (DepartmentofRespiratoryMedicine，Ton~iHospital，Ton# MedicalCollege，HuazhongUniversityofScienceandTechnol- ogy，Wuhan430030，Ch／na．E—mail：chengdon~un@126．corn) [ABSTRACT] AIM：Toinvestigatetheactiviytchangeofvoltage—dependentdelayedrectifierpotassiumchnanel (Kv)onhumna airwaysmoohtmusclecells(HASMCs)aftertransfectionofKv1．5antisenseoligonucleotides(AsOND)， na dtodiscusshteregulatingmechanism ofKv1．5．M ETHODS：ThemRNAna dproteinexpressionsofKv1．5inliposome — mediatedKv1．5AsOND transfectedHASMCswere measuredwiht techniquesofreversetrnascriptase—polymerasechain reaction(RT—PCR)andWesternblotting．KvactivitiesintransfectedHASMCswereinvestigatedwihtwhole—cellpatch clamp．RE~UILTS：AfterHASMCwere transfectde byliposome—mediatde Kv1．5AsOND．htemRNAna dproteinexpres- s