氨对人表皮角质细胞生长与代谢的影响.pdfVIP

中国医药生物技术2007年4月第2卷第2期ChinMedBiotechnol，April2007，V01．2，No．2 ·论著· 氨对人表皮角质细胞生长和代谢的影响 黄剑峰，王佳鸣，崔磊 【摘要】 特征的研究基础之上，尤其是针对细胞生长的营养 目的 了解人表皮角质细胞培养过程中，氨对细胞生长和代 和培养环境中的抑制性物质的研究。氨是细胞培养 谢的影响。 过程中的主要代谢副产物之一，主要来源于谷氨酰 胺的脱氨反应及其自然降解过程口圳。低浓度的氨就 方法收集3～6岁健康幼儿包皮，以Dispase11分离、收 会对细胞生长产生抑制，其作用机制主要为干扰正 集原代细胞，角质化细胞专用无血清培养基(Keratinocyte- SFM)培养。待细胞培养至第4代，更换含不同氨浓度的培常的电化学梯度、抑制酶反应(主要抑制谷氨酸脱 养基，考察细胞生长和代谢的变化。 氢酶的活性)、改变细胞内pH值、改变质子浓度梯 mmol／L时， 度、影响细胞的内吞和胞吐作用、增加细胞的维持 结果氨抑制了细胞的生长，当氨的浓度为9．23 脉冲培养结束时的活细胞密度(0．84x105个／m1)进一步下能消耗等[5】。关于氨对人表皮角质细胞代谢过程的 降，细胞存活率下降至54．5％；氨对细胞生长的抑制作用遵 影响，迄今尚未见文献报道。鉴于此，我们通过不 循二级抑制模型，其模型常数Ka为4．46(mmol／L)2即当 culture)试验，研究 同氨浓度下的脉冲培养(pulse 氨的浓度为2．11mmol／L时，细胞的比生长速率下降到最大了氨对人表皮角质细胞生长和代谢的影响，以期为 比生长速率的50％。当氨浓度从1．23mmol／L增加到1．73 大规模制各状态良好的组织工程皮肤种子细胞提 mmol／L，细胞对葡萄糖的得率系数下降了48．0％，葡萄糖的 供理论依据。 比消耗速率上升了14．8％；与氨浓度为1．23mmol／L相比， 9．23 mmol／L的氨使乳酸对葡萄糖的得率系数增加了12。0％， 1材料与方法 乳酸的比生成速率增加了53．3％。氨浓度的增加明显改变了 1．1 材料 细胞的代谢，促进了细胞对葡萄糖的利用，消耗的葡萄糖更 皮肤组织来源于上海市第六人民医院泌尿外 倾向于乳酸的生成。当氨浓度为9．23mmol／L，谷氨酰胺的 科3～6岁健康幼儿包皮(获得知情者同意)；培 比消耗速率和氨的比生成速率分别是氨浓度为1．23mmol／L 的20．2％和6．2％。氨抑制了谷氨酰胺的消耗，谷氨酰胺在 生成谷氨酸后经过脱氢途径的流量减少，更多地向转氨途 径，即低效率的产能途径偏移。 结论在人表皮角质细胞的培养过程中，应尽量减少氨的 积累。 Roche公司)。 【关键词】氨； 细胞生长过程； 代谢； 角蛋白细胞 1．2方法 中国医药生物技术；2007,2(2)：123—129 1．2．1 表皮细胞收集【6】 以氯霉素灭菌溶液冲洗 www．cmb