全谷豆复合包改善脂代谢紊乱大鼠胆固醇代谢机制的探讨.pdfVIP

2×MasterPCR cDNA kit：Fe瑚entas公司产品； Mix：南京天为时代科技有限公司； Synthesis Taq PcR引物：上海生工生物科技服务有限公司；琼脂糖：si舯a公司 1．1．3试验动物 燥、安静、12h光照周期。 1．1．4饲料配方 采用完全配方饲料，其中阴性对照组饲料参照美国营养学会推荐的AIN一93M¨。实验动物合成饲料 配方配制而成，该配方中的蛋白质、脂肪、矿物质和维生素的含量是保证动物生长发育所必需的， 在此基础上适当调整蛋白质和蔗糖的比例，增加饱和脂肪酸含量，制成高脂组饲料¨。。同时用粳米 粉、面粉或全谷豆复合包粉分别代替高脂饲料中蔗糖和淀粉部分，配制成米面组和全谷豆复合包组 饲料。各组饲料配方见表1。 表l 四组实验动物饲料配方的构成(g／10009) 注： 各 组饲料 能量差 异不超 过四组 平均值 的lO％。 1．2实验 方法 大 鼠在实 验前适 应性饲 养一周 后，按照 血脂水 平随机 分为阴 性组、全 谷豆复 合包组、 米面组 和高脂组，每组11只分别喂饲相应的饲料，确保每只大鼠的食物摄入量和能量基本相同。每周称量 体重一次并记录摄食量。实验结束后，股动脉取血，脱颈椎处死，分离脏器，称重，并留存肝脏组 织和脂肪组织于一80℃冰箱备用。 307 1．3检测指标及方法 TG(册ol／L)×1／5]。 1．3．2血清内脂素的测定：双抗夹心酶联免疫吸附试验(ELISA)法。 1．3，3肝脏组织中SREBP_2、LDLR及脂肪组织中内脂素fnRNA表达的测定： 从GeneBank中查得大鼠目的基因序列，再通过Primer1)remier5软件设计引物并由上海生工公 司合成。引物具体的序列信息见表2． 表2引物序列及扩增产物片段大小 按总RNA提取试剂盒的操作步骤提取肝脏组织中的总RNA。 ul，州TP RT_PCR：逆转录反应体系总体积20ul包括：提取的总RNA5ul，5×反应缓冲液4 u u p u1。 (10咖01·L-1／)2ul，Oligo(DT)ll，RNA酶抑制剂l1，逆转录酶ll，无Im酶水6 25u ul，上游引物lul，下游引物1u u1，无RNA酶 l包括：逆转录引物1 l，TaqDNA聚合酶12．5 水9．5u 脂素)35s、57℃(p—actin)35s；72℃45s；72℃8min。 取PCR产物10pl，在1．0％左右的琼脂糖凝胶上点样。应用0．5×TBE缓冲液，100V电压电泳40 分钟左右，在凝胶成像仪上观察结果。对电泳后凝胶拍摄的照片进行灰度分析，用目的基因和 B—actin二者扩增条带的吸光峰面积积分比值的大小反映基因表达水平的高低。 1．4数据统计及处理 数据以；±5表示，采用SPSS18．0进行统计分析。采用one—wayANOVA和重复测量方差分析进 行显著性检验，组问比较采用SNl(检验，差异显著性设定为只O．05。 2．结果 2．1全谷豆包干预前后对脂代谢紊乱大鼠体重的影响 实验开始时，各组大鼠体重没有明显差异(尸O．05)，结束时，全谷豆复合包组大鼠体重明显低 于高脂组组和米面组(尺O．05)，与阴性组差异无统计学意义(尸0．05)。重复测量方差分析结果显示： 不同实验时间段里，同组大鼠体重变化差异有统计学意义(F=1846．718，尺0．001)。结果见表3。 表3．不同饲料对各组大鼠体重的影响(1±一，n：11) 组别