高效液相色谱法测定赤霉素A3含量.pdfVIP

N-dimethylformamide:water23:3:6) as tor.The coefficients of variation were less than mobile phase,1.5ml/min flow rate in the firstsix- 5%，and the recoveries were more than 90%. teen minutes,then 2ml/min and UV-280nm detec- 高效液相色谱法测定赤霉素A3的含量 张 政 张 强* 王转花 （山西大学分析测试中心，* 分子科学研究所，太原,030006） 赤霉素(Gibberellins)是一族重要的植物生长调 （二）取赤霉素A3系列标准溶液，各进样5l，以 节剂，各种同系物中以赤霉素A3的生理活性为最 进样量（g）对峰面积(V sec)作图，线性关系良 强，农用赤霉素质量的高低也以A3的含量来确定。 好，相关系数 =0.9984，回归方程为Y=1.095 现通用的荧光比色法只能测定赤霉素各组分的总含 107X-2.668 105(n＝10)。 量()不能检测出各有效组分，特别是对其主要成分 A3的含量不能准确测定。本文用C18径向加压短柱 和甲醇? -水溶剂系统对山西交城制药厂等厂家生产 的农用赤霉素进行了测定，得到较为满意的结果。本 法可用于农用赤霉素中主要成分A3含量的测定。 实验部分 （一）仪器与试剂 Waters液相色谱仪，包括 510泵、M441紫外检测器、730数据处理机、U6K进 样器。甲醇，液相色谱用溶剂，黄岩化学试剂厂产；乙 酸，分析纯；赤霉素A3标准品，Sigma产品；农用赤 （三）在样品溶液中加入已知量的标样溶液测定 霉素，上海十八制药厂、山西交城制药厂产品。 其回收率，结果见表1。 （二）色谱条件 Radial-Pak C18径向加压柱， 表1回收率测定结果 (n=5) 10cm 8mm涣流动相：甲醇：水（1％乙酸）=34： 66；流速：2m1/min；检测波长：254nm(2)；柱温30 ； 纸速：5mm/min （三）标准溶液 1．精确称取赤霉素标准品 100mg，用甲醇溶解并定容至50ml配成0.lmg/ml （四）对同一样品A3含量重复7次测定，检验方 至2.0mg/ml的标准溶液。2.称取农用赤霉素结晶 法的精密度，结果X=82.64%,SD=1.33,CV= 粉100mg，用甲醇溶解并定容至50ml，经0.45m 1.8重现性较好。 Millipore微孔滤膜过滤后配成 0.1mg/ml至 （五）用反相HPLC方法可将农用赤霉素各组 2.0mg/ml的样品溶液。 分较好地分开。由于缺少其它组分的标准品，未能确 结果与讨论 定其它组分的类型，但不影响对主要组分A3含量测 定。Radial-Pak C18径向加压短柱具有流速较快，出 （一）以甲醇-水为流动相时，色谱峰型不好，拖 峰迅速的优点。但其柱效较低，连续工作时需用流动 尾程度较严重。加入甲酸、乙酸、磷酸后可使峰型得 相每日洗柱1到2次，每次30min，以保证分离效 到改善(3)。经对比试验，当甲醇：水(1％乙酸)=34 果。样品不纯时，每进样60至80次应更换Guard- ：66时可获得理想的色谱图(图1)，赤霉素A3组分 Pak预柱，以延长柱使用寿命。赤霉素具有生理活 的保留时间为5.30min。 性，在溶液状