高效液相色谱法检测蛹虫草中虫草素含量.pdfVIP

验 2010(6) 龟固苗 bIe技m■ 术啕-■． ●●■■ 高效液相色谱法检测蛹虫草中的虫草素含量 代玲玲1’2 李婷婷p王雅玲≯马 垄1 赵轶男1 孙力军2 (1大连民族学院生命科学学院，辽宁大连116600；2广东海洋大学食品科技学院，广东湛江5240882) 摘要 对蛹虫草固体培养物中的虫草素进行微波提取，建立 标准溶液，置-4℃冰箱中保存。 了HH￡法测定虫草素含量的方法。采用VenusilMP—Cm色谱 将蛹虫草固体培养物60℃烘干，粉碎，精密称取培养物 柱(5肛m，4．6栅×150m)，以甲醇和蒸馏水为流动相进行等梯 粉末o．50009，放人锥形瓶中，加50．00mL蒸馏水，轻轻摇匀， 度洗脱。流速1mumin，检测波长260啪。结果表明，蜂面积与将锥形瓶置于微波炉中，中火处理3min。取样品提取液用滤 虫草素浓度呈良好的线性关系(0．9997)，精密度高，稳定性好。纸过滤，滤液再经0．22¨m微孔滤膜压滤。 经测定，试验所采用的蛹虫草中虫草素的含量为3．123mg幢。该 1．4 色谱条件 Venusil MP—C18色谱柱(5斗m，4．6咖× 法操作简便，灵敏度高，所需时间短，为虫草素快速分析提供了 IIlin 150mm)，柱温25℃。流动相：A，甲醇；B，蒸馏水；0～15 可靠依据。 Inin100％A 15％A等梯度洗脱，20IIIin时升至100％A，20一30 关键词 高效液相色谱IDD微波提取虫草紊 用以平衡色谱柱；流速l 文章编号 1000一8357(2010)06枷65—02 2结果与分析 蛹虫草(comyce雕m甜缸赫)又称北冬虫夏草，其功效与 冬虫夏草近似|lJ，在药化、药理和临床试验中证明可作为冬虫 2．1 系统适用性试验在1．4描述的色谱条件下，分别取标 夏草的重要人工替代品之一【2】。虫草素(cordycep讥)即3’一脱氧 准品溶液和样品溶液20斗L，进样测定，样品中的虫草素可以 腺苷，为含氮配糖体的核酸衍生物，属嘌呤类生物碱，是蛹虫 达到良好的分离，理论塔板数不低于4000，空白无干扰(图1 草的主要活性成分之一，其含量多少是衡量蛹虫草品质高低 和图2)。 的重要依据。研究发现虫草素通过诱导产生白介素一lO，同时 抑制白介素一2的生成，具有较强的免疫调节功能pJ，可干扰癌 细胞RNA合成【4】，虫草素还表现出极强的抗HIV病毒【习等特 性。目前虫草素的测定多采用薄层色谱扫描法(r11￡S)和高效 液相色谱法(H眦)，TLCS具有展开时间短，显色方便且价格 低廉的特点，已成为定性定量分析的有效手段fq，HPLC也是 一种重要的检测技术，快速、准确、灵敏度高。国内已有人综合 HPLC与TLCS的优点，将两者结合起来，对蛹虫草与冬虫夏 时间觚n 图1标准品色谱圈 草的虫草素含量进行定性定量测定们。研究采用微波提取，高 效液相色谱(HPLC)检测，建立一种快速检测蛹虫草中虫草索 含量的方法，为蛹虫草和虫草素的相关研究提供参考。 1材料与方法 1．1 仪 器LC一20