明胶在聚氨酯表面的固定化和其对内皮细胞生长的促进作用.pdfVIP

维普资讯 Vo1．23 高等 学校 化 学 学报 NO．6 2002年6月 CHEMICALJOURNA[OFCHINESEUNW ERSIT1ES 2l0～ l2l2 [研究简报] 明胶在聚氨酯表面的固定化及其 对 内皮细胞生长的促进作用 高长有 ，襄 峻 ，管建均 ，沈家骢 (1．浙江大学高分子科学与工程学系．2 硅材料国家重点实验室．杭州 310027) 关键词 聚氨酯；明胶；偶联{内皮细胞；细胞相窖性 中圈分类号 0631 文献标识码 A 文章编号 理想的组织工程支架材料应具备有效促进细胞生长的能力和 良好 的组织相容性．然而现有 的聚合 物生物材料大多呈现疏水性，不能有效支持细胞的生长 【-．细胞外基质和血清中含有对细胞粘 附、生 长和繁殖有显著促进作用的多种活性因子，如纤维粘连蛋白(Fn)、屡粘连蛋白(Laminin)、胶原(Colla— gen)、多聚赖氨酸和冷析蛋白(CIG)等。一一．把这些因子固定到材料表面，可为细胞的粘附生长提供理 想的条件．本文通过碳二酰亚胺脱水缩合技术 ．将明胶 (Gelatin)共价键合到聚甲基丙烯酸接枝改性 的 聚氮酯(PU—g—PMAA)薄膜表面，并初步研究了内皮细胞在Pu—g—PMAA—g—Gelatin薄膜表面的生长行 为．该方法对含有胺基或羟基的细胞生长因子在生物材料表面的固定化具有普适性． 1 实验部分 参照文献[6，7]方法，用紫外光氧化接枝技术将甲基丙烯酸(MAA)接枝到聚氨酯(聚酯型，Estane 5827l，BFGoodrich公司产 品)表面上 ，得到 Pu—g—PMAA．将 PU—g—PMAA稷泡于10mg／mL 的 l一(二甲基胺丙基)一3一乙基碳化二亚胺(EDAC)的磷酸盐缓冲溶液(pH一7．0)中．o～4c反应24h．以 大量蒸馏水冲洗后，放人2mg／mL明胶(化学纯，上海试剂厂产品)的磷酸盐缓冲溶液中，继续反应24 h．洗涤后 ，以4C的磷酸盐溶液浸泡24h，真空干燥至恒重．ATR—FTIR光谱 由NicoletMagna—IR560 测定；光电子能谱(ESCA)由ESCALABMark II型多功能电子能谱仪测定，激发源为Al d，荷电位 移校正取C =285．0eV．参照文献方法[8，9]培养内皮细胞． 2 结果与讨论 明胶是胶原的降解产物，具有促进细胞粘附和生长的性能．因其是水溶性蛋 白．物理吸附不能与 基底材料形成稳定的结合，随着培养过程中的换液而被洗脱故不能有效促进细胞生长口．PU表面的 羧基既可促进 内皮细胞的生长 ]，又为共价键合生长因子提供了活性位点．利用水溶性碳二酰亚胺 EDAC的脱水缩合反应，Pu上的羧基可与明胶分子上的胺基反应生成酰胺键，从而将明胶固定 ]．其 过程如图l所示． 由明胶固定膜 (PUg—PMAAgGelatin)与MAA接枝膜 (PU—g—PMAA)的ATR—FTIR谱及差谱 【图2)可见，前者在3325，l655和1556cm 处的吸收明显大于后者，归属于明胶 中的胺基或酰胺基． ESCA分析可进一步证明明胶 固定化的发生．比较明胶固定前后的ESCA谱图可知，在明胶固定后c， 谱 中出现了明显的c—N和一c()NH一的峰，分别位于286．o和288．0eV处 ]．Nt，谱中，氮峰的强度则 明显高于 MAA接枝膜．由表1可见 ，固定明胶后，表面N，／c 比增加 ，即表面氮含量增加．随MAA 接枝量的增加，N ／c 比增加，说明表面明胶的键合量增加．当EDAC和明胶的浓度固定时，键合量 取决于PU表面MAA含量．MAA含量高，则可参加反应的羧基的量增加，明胶的键合量提高． 收稿 日期：200103—28． 基金项 目：国家 自然科学基金 (批准号和国家重点基础研究发展规划项 目(批准号 G1999054305)资助 联系』、茼介；高长有(I9瞄年出生)，男．教授，主要从事组织工程材料和 自组装研究 E—mailcygao@mai[h-j．cn 维普资讯 高长有等：明胶在聚氯酯表面的固定化噩其对 内皮细胞