双柱双泵高效液相色谱-电化学检测法测定尿中儿茶酚胺.pdfVIP

双柱双泵高效液相色谱-电化学检测法 测定尿中儿茶酚胺 袁倚盛 赵飞浪 杨巷菁 沈 敏 （南京军区总医院中心仪器分析科） 儿茶酚胺类（CAs）化合物是人体内重要 铝 （色谱用，上海五四农场化学试剂厂）； 的生理活性物质，主要包括肾上腺素（E）、 Tris（三羟甲基氨基甲烷，上海生化试剂商 去甲肾上腺素（∟NE┘岸喟桶?(DA)Ｄ蛑 店）；其余试剂均为分析纯。本法中水溶性 CAs的水平不仅可作为嗜铬细胞瘤等疾病的 试剂均用亚沸蒸馏水配制。 诊断标准[,2]而 矣肷龉δ芄叵得芮校 11mol/LTris缓冲液(pH86)：Tris 此具有重要的临床诊断和研究价值[]图 121.2g，EDTA-2Na20g 加水至1000ml。 CAs在体液中含量低，以往用萤光分光 用? mol/L HCl调pH为8.6。 光度法只能测E和NE的总量，无法测DA。 CAs标准溶液：精密称取E、NE和DA 采用HPLC-UV法虽能分别测定上述三种物 各1.00mg置同一容量瓶(100ml)中，加 0.1mol/L HCl至刻度，避光4℃存放。 质[]，  槊舳鹊停 荒艽锏郊觳馍 镅 的目的。本法采用国产仪器组成双柱双泵的 （二）双柱双泵的HPLC-ED系统 高效液相色谱-缁 Ъ觳庀低常℉PLC- 该系统由双泵、双柱（一个分析柱，一 ED）  芍苯硬饽蛑械腅E NE虳DA 哂 个氧化铝柱）及双阀组成。其流程图参见图 灵敏度高、操作简便快速、结果准确等特 1。样品由阀 进入特制大体积(1.6ml)取 点。E、NE和DA的回收率均达90％以上， 样管后，切换阀 ，流动相 样品送入阀Ⅱ 线性范围1.67-33.3ng/ml 钚】杉觳 中的微型Al2O 3柱中，使CAs吸附在氧化铝 80pg/ml，日内误差与日间误差的C分直别 柱上，而其它杂质被清洗掉。10分钟后，切 小于6％和15％。 换阀 ，由该流动相 将吸附在氧化 铝柱上 的CAs洗脱下来并带入分析柱。流动相的流 实 验 部 分 速均为1.0ml/min。CAs经分析柱分离后被 （一）仪器、试剂与标准溶液 ED检测。分析完毕后，用水清洗氧化铝柱 WGP-5型微量高压平流泵（杭州之江 至中性，以备下次进样。ED的极化电压为 科学仪器厂），YSB-2型平流泵（上海科学 0.778V，灵敏度：250或2100mV。 仪器厂）。YP-101型液相色谱仪电化学检 （三）样品收集与处理 测馄器 （江苏江宁分析仪器厂）；7105型六通 24小时总尿：第一次留尿后即加入 平面进样阀（Rheodyne,.S.A.），琄K-501 6mol/LHCl 10ml作为防腐剂、稳定剂，测 通平面进样阀（上海科学仪器厂）。φ4.6 其总量后取10ml置4℃备用。长期保存应置 200mm不锈钢柱（大连色谱开发中心）， 低温冰箱中。 内填YWG-C18(10m);24mm不锈钢柱 取上述尿液 (pH3.5左右)4.0ml，加醋 （自制），内填酸性氧化铝200目以上）。 酸乙酯4.0ml振荡3分钟，离心10分钟 ENE及DAFluka，瑞士）；酸性氧化 (2500r/min)。取下层液体0.5ml，加水 1.5ml，1mol/LTris缓冲液1.0ml，混煸匀后 但CAs在碱性条件下易氧化，因此Tris缓冲 进样。 液必须在进样前加入。