人UroplakinII与小鼠UroplakinII启动子活性与组织特异性对比.pdfVIP

人UroplakinII 启动子与小鼠UroplakinII 启动子在人 细胞株中的启动活性和组织特异性对比 1 1 1 2 朱宏建 ，曾祥福 ，魏守顺 ，郭应禄 1 武警总医院泌尿外科，北京（100039 ） 2 北京大学第一医院，北京大学泌尿外科研究所，北京（100034 ） 摘 要：背景及目的：膀胱癌是泌尿外科最常见的恶性肿瘤，基因治疗已成为治疗恶性肿瘤 的重要方法之一。本研究旨在探讨人UroplakinII (UPII) 启动子与小鼠UPII 启动子在人细胞 株中的启动活性和组织特异性强弱。方法: 构建以人或小鼠 UPII 启动子为调控基因，以绿 色荧光蛋白（GFP ）和荧光素激酶（Luc ）为报告基因的重组质粒，应用脂质体转染技术， 将重组质粒转染入膀胱移行细胞癌细胞（BIU-87 ）和肾癌细胞（GRC-1 ）、脐静脉血管内皮 细胞（EC ）、肺癌细胞（A549 ）、皮肤成纤维细胞（Hs27 ），利用共聚焦显微镜、流式细胞 仪和微板检测仪观察细胞表达GFP 和Luc 的情况。结果: 含人UPII 启动子重组质粒转染后， BIU-87 表达GFP 较多，10-15/HP，亮度较强，流式细胞仪测定表达量为10.1%。而GRC-1 、 EC 细胞表达极少，0-5/HP ，亮度暗，流式细胞仪测定表达量为0 和 1.8 ％。Luc 在 BIU-87 中的表达量是其它组织细胞的2.2 倍以上。含小鼠UPII 启动子重组质粒转染后，BIU-87 表 达GFP 较多，5~10/HP ，亮度较强，流式细胞仪测定表达量为4.34% 。而EC 细胞表达极少， 0~2/HP ，亮度暗，流式细胞仪测定表达量分别为0%。Luc 在BIU-87 中的表达量是其他组织 细胞的1.8~8.2 倍，人UPII 启动子与小鼠UPII 启动子相比，无论是GFP 还是Luc 差异有显 著性（P0.01 ）。结论: 人UPII 启动子比小鼠UPII 启动子在人细胞株中具有更高的启动活 性和更低的组织特异性。为靶向性基因治疗膀胱癌提供了实验依据。 关键词：UroplakinII ，启动子，膀胱癌 中国分类号：R730.2 文献标识码：A 文章编号：1000 －467X 膀胱癌是泌尿外科最常见的恶性肿瘤，发病率居全身各种肿瘤的第五位[1] 。传统的治 疗方法晚期肿瘤患者缺乏有效治疗。目前基因治疗已成为治疗恶性肿瘤的重要方法之一。靶 向性基因治疗成为基因治疗的研究热点，方法之一是应用组织特异性启动子，在组织特异性 启动子后接治疗基因，使治疗基因在靶组织中特异性表达，可降低系统副作用，提高治疗效 果[2] 。 近年发现有一组尿路上皮分化特异性糖蛋白 Uroplakins(UPs)[3] ，根据它们分子量的不 同，分别命名为UroplakinIa （UPIa ）、UroplakinIb （UPIb ）、UroplakinII （UPII ）、UroplakinIII [4-5] [6] [7] （UPIII ） ，这4 个塘蛋白仅存在于尿路移行上皮细胞 。1995 年，Lin 等 克隆了小鼠 UPII 的启动子，并在转基因小鼠中证实了它的作用。 本实验室发现小鼠 UPII 启动子在人膀胱移行细胞中具有特异性启动活性[8-9] ，并应用 多聚酶联反应技术（PCR ）克隆人 UPII 结构基因第一外显子 5’端上游一段 2542bp 序列 （hUPII ），并证实它具有人UPII 启动子功能[10] 。为探讨人UroplakinII (UPII) 启动子与小鼠 UPII 启动子在人细胞株中的启动活性和组织特异性，构建以人或小鼠UPII 启动子为调控基 因，以绿色荧光蛋白（GFP ）和荧光素激酶（Luc ）为报告基因的重组质粒，应用脂质体转 染技术，将重组质粒转染入人类膀胱移行细胞癌（BIU-87 ）、肾癌（GRC-