叶绿素铜钠对免疫介导再生障碍性贫血小鼠骨髓间充质干细胞TGF-β_1表达的影响.pdfVIP

中国中医药科技2012年7月第 19卷第4期 July2012Vo1．19No．4 ·327 · 叶绿素铜钠对免疫介导再生障碍性贫血小鼠骨髓 间充质干细胞 TGF—I3 表达的影响半 任 莉 蒋慧芳 (。浙江中医药大学同等学力研究生在读 ·杭州310012 浙江省立同德医院 ·杭州310012) 摘 要 目的：探讨叶绿素铜钠对免疫介导再生障碍性贫血小鼠骨髓 间充质干细胞(mesenchymalstem ceils，MSC)转化生长因子 13，(TGF—B，)表达的影响。方法：参照文献方法建立免疫介导再障小鼠模型。 实验随机分为6组，正常对照组、再障模型对照组、叶绿素铜钠小剂量组、叶绿素铜钠中剂量组、叶绿素铜 钠 高剂量组、环孢菌素对照组，每组 1O只，分组给药15天后处死。取各组小鼠的骨髓进行 MSC培养，采 用酶联免疫吸附实验 (ELISA)检测小鼠骨髓MSC分泌的TGF—B。浓度。结果：模型组小鼠骨髓 MSC TGF—p分泌水平低下，与正常组比较有明显差异；叶绿素铜钠各组的TGF—p 水平较模型组明显增高 (P0．05或P0．O1)；与阳性药环孢茵素相当。结论：叶绿素铜钠能促进免疫介导再障小鼠MSC分泌 TGF一13l。 主题词 贫血，再生障碍性／中医药疗法 叶绿素铜钠 ／治疗应用 转化生长因子 B 小鼠 再生障碍性贫血 (以下简称再障)是以外周血全血细胞 水将 cs配成 1ms／m~的溶液。TGF—B ELISA试剂盒 ：eBio- 减少和骨髓增生不良为主要特征的疾病，其发病机制主要是 science公司o 免疫功能紊乱、造血微环境异常和造血干祖细胞破坏，其 中 1．3 免疫介导再障小鼠模型的建立及分组给药 免疫功能紊乱在再障的发病过程中起到非常重要的作用，主 再障模型的建立 ：根据周永明方法 J，制成单细胞悬液 要包括淋巴细胞异常活化 ，并且分泌大量的免疫因子，使机 5x10／ml浓度，每只再障动物模型注射0．2ml，正常对照组 体处于免疫活化状态。既往研究表明，CD；cD 细胞可能 静脉输入无菌生理盐水 (NS)0．2ml。 通过细胞接触、分泌抑制性细胞因子如 IL—l0和TGF— 。 6o只小鼠随机分为正常对照组、再障模型对照组、叶绿 等发挥免疫抑制作用。 素铜钠小剂量组、叶绿素铜钠中剂量组、叶绿素铜钠高剂量 骨髓间充质干细胞 (mesenehymalstemeeHs，MSc)是骨 组、环孢菌素对照组 ，每组 10只，雌雄各半。均灌胃给药，正 髓造血微环境的主要组成部分，它通过介导干细胞(HSC)和 常组、模型组小鼠灌 胃生理盐水，小剂量组灌胃叶绿素铜钠 骨髓造血微环境的黏附并分泌造血生长因子而发挥造血支 25mg／kg·d～，中剂量组小 鼠灌胃叶绿素铜钠 50mg／kg· 持作用 j。MSC除具有支持造血作用外 ，还具有免疫调 d～，高剂量组灌 胃叶绿素铜钠 100mg／kg·d～，阳性组小 鼠 节作用，黄科等 报道，MSC在体外可分泌多种细胞 因子 ， 灌胃Cs25mg／kg-d～，每天 1次，连续给药 l5天后处死。 其中TGF—B。是重要的免疫负调节因子，在免疫调节和免疫 取骨髓进行细胞培养。 耐受中具有重要作用，可通过减少Th细胞细胞因子 (^r一干 1．4 骨髓Msc培养 扰素)的分泌，调节 ThI／，Ih：细胞的功能 。本研究拟通过 原代骨髓MSC细胞培养7天后 ，待细胞长至约50％～ 免疫介导再生障碍性贫血 (再障)小鼠模型的建立，探讨叶 6o％融合时，用0．05％胰~t／EDTA(Gibco)消化传代，接种密 绿素铜钠对其骨髓 MSC分泌TGF—p 的影响。 度为4×10 ·cIIl2，培养瓶预涂 5n昏／InlF