牛α1,3-半乳糖转移酶基因部分片段的克隆和无启动子打靶载体的构建.pdfVIP

农业生物技术学报 Journal of Agricultural Biotechnology 2003,11 6冤院 612~6 15 ·研究论文· 牛 1，3- 半乳糖转移酶 因部分片段的克隆 及无启动子打靶载体的构建* 立栋 李雪辉 胡宏宇 安晓荣 林爱星** （中国农业大学农业生物技术国家重点实验室, 北京 100094 ） ： 。其中 摘要 利用La-PCR 的方法，从牛的 因组中成功地获得2.4 kb 和5.2 kb 的扩增产物 2.4 kb 片段位于5~7 外显子之 间，包括了完整的第 5 及第 6 内含子；5.2 kb 片段位于 8~9 外显子，包括了完整的第 8 内含子。2 个片段分别克隆于 。 pCR-XL-TOPO 载体。测序结果表明所克隆的两片段均为牛 1，3 半乳糖转移酶基因的 因组序列 2.4 kb 和5.2 kb 的两个片 段分别作为打靶载体的5 、3 同源臂构建了无启动子打靶载体TOPO-IRESneo7.6。电击转染牛胎儿成纤维细胞以期敲除牛的 1，3 半乳糖转移酶基因。 关键词： 1,3- 半乳糖转移酶基因；基因打靶；无启动子打靶载体 Cloning of the Genomic Fragments of Bovine 1,3-galactosyltransferase Gene and Construction of a Promotorless Targeting Vector Chen Lidong Li Xuehui Hu Hongyu An Xiaorong Lin Aixing觹觹 (State Key Laboratory for Agrobiotechnology, China Agricultural University,Beijing 100094,China) Using the LA-PCR method, two fragments 2.4 kb and 5.2 kb were cloned from bovine genome. The 2.4 kb fragment between the fifth exon and the seventh exon included the whole fifth intron and the seventh intron. The 5.2 kb fragment between the eighth exon and the ninth exon included the whole eighth intron. Sequencing result revealed that two fragments were both the segments of bovine 1, 3-galactosyltransferase( ) gene. The 2.4 kb and 5.2 kb fragments were used to construct a promotorless