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第 28 卷第 2 期 唐山师范学院学报 2006 年 3 月 Vol. 28 No.2 Journal of Tangshan Teachers College Mar. 2006 黏虫感染绿僵菌后体内蛋白质和过氧化物酶的变化 张淑红，李春香，张新蕊，王 静 （唐山师范学院 生物科学技术系，河北 唐山 063000 ） 摘 要：通过聚丙烯酰胺凝胶电泳技术（PAGE ）分析黏虫幼虫感染绿僵菌后体内可溶性蛋白以及过氧化物酶 的变化。试验结果显示感染的幼虫体内蛋白质增加的幅度明显低于未感染的幼虫，并且分别感染3d、6d、9d 后，感 染组黏虫体内的蛋白质含量明显高于对照组；感染后幼虫体内蛋白质与过氧化物酶的电泳图谱发生比较明显的变化。 关键词：绿僵菌；黏虫；蛋白质；过氧化物酶 + 中图分类号：S476 .12 文献标识码：B 文章编号：1009-9115 （2006 ）02-0024-03 黏虫(Mythimna separata)是一种以危害粮食作物和牧草的多食性、迁移性、暴发性的害虫。目前对于黏虫的防治以广谱 性化学农药为主，但化学农药本身的缺点和无限制使用使黏虫已对多种农药包括有机磷、有机氯、氨甲酸酯、拟除虫菊酯等， 甚至对生物农药 Bt 都产生了不同程度的抗性并引发了一系列生态环境问题。因此，人们正在积极探索，应用生物农药防虫 治虫。绿僵菌是广谱性昆虫病原真菌，大规模的田间试验和室内害虫感染形态学观察已充分证明其能侵染 200 多种农林害虫。 [1] 最近的研究已从形态学水平上发现绿僵菌可以侵染黏虫 ，从生化角度分析绿僵菌感染对黏虫幼虫体内蛋白质和同工酶的影 响，为进一步确定黏虫感染绿僵菌的病理机制以及有效进行生物防治提供理论依据。 1 材料与方法 1.1 实验材料 1.1.1 供试菌种：柱孢绿僵菌(M.cylinrosporae) ，菌种来源于中国农科院植保所菌中保藏中心。 1.1.2 供试虫源：2～3 龄黏虫，中国农科院植保所人工繁殖培养。 1.2 绿僵菌的感染方法 9 用 0.1%吐温-80 无菌水配制成孢子浓度为 10 个/mL 的孢子悬浮液。用注射器吸取定量的孢悬液滴于大小基本一致的 3~4 龄幼虫体表，处理后放入装有玉米叶的培养皿中，置于室温下培养。 1.3 蛋白质含量的测定方法 分别取感染后 3d，6d，9d 和同期未感染的幼虫，放入研钵中加入少量 Tris-HCl 缓冲溶液（pH8.0 ）充分研磨，用Tris-HCl 缓冲溶液(pH8.0)定容至 5mL 。4 ℃，10000r/min 离心 10min，取上清液。用蒸馏水适当比例稀释，利用考马斯亮蓝 G250 染 [2] 色法，通过分光光度计在 595nm 波长处测定蛋白质吸光度 A 。 1.4 聚丙烯酰胺凝胶电泳方法 分别于感染后 3d，6d，9d 取幼虫放入冷藏的研钵中，加入 20%蔗糖溶液研磨，定容至 1mL，4 ℃下 10000 r/ min 离心 10 min ，上清液即为蛋白质电泳样品。以同样方法取幼虫，加入 Tris-HCl （pH=7.4 ）快速研磨，4 ℃、10000r/min 状态下离心 10min，