三种提取HMG染色体非组蛋白方法比较1).pdfVIP

遗传 HEREDITAS (Beijing) 9(1);39-421987 技 术 与 三种提取HMG染色体非组蛋白方法的比较’‘ 方 法 刘庆榕 吴鹤龄 北（京大学生物系） 非组蛋白是在染色体中组蛋白以外的蛋白 仪器 高速禽心机 B（eckmanJA-21); 质。它除了含有基因的调控蛋白外，还具有许 氨基酸分析仪 B（eckman121MB);BS-423稳 多与核酸代谢有关的酶和结构蛋白。非组蛋白 压稳流电泳仪 北（京生化仪器厂）；控温多用高 从染色体复合物上分离下来后，很容易聚集在 速组织捣碎器 江（苏江阴科学仪器厂）。 一起，也很容易被蛋白水解酶降解。所以，它们 试剂 PMSF(Merk)；考马斯亮蓝 R- 很难在溶液中保持原状31〔。目前，非组蛋白中能 250,fl-琉基乙醇(Fluka)。本实验中所用其它 够较好地分离、纯化，并对其生物学性质及结构 试剂均为国产，分析纯。 功能加以详细研究的是一组称为高泳动因子的 胸腺组织染色质的制备 小牛胸腺或猪 染色体非组蛋白，简称HMG染色体非组蛋白。 胸腺300克绞碎，加到1,500ml0.075MNaCl- HMG蛋白质分子量较低 M（W30,000)，可 0.025MEDTA-0.5mMPMSF(PH7.5)溶液中， 以用稀盐溶液或高氯酸从细胞核提取，并能溶 刀匀浆器全速匀浆2分钟，用斗层纱布过滤匀 于2沁三氯乙酸溶液中。HMG蛋白质主要含 浆液，除去结缔组织。滤液2,000g离心30分 有4种主要成份： HMGHMG2,HMGl4和 钟，沉淀加到350ml上述NaCI/EDTA溶液中， HMG,,,HMG蛋白质与组蛋白有相似之处，它 刀匀浆器全速匀浆 1分钟，匀浆液2,000g离心 们的碱性氨基酸残基的含量很高 2（5-30多）； 20分钟。沉淀加到300mlNaCI/EDTA溶液中 与组蛋白不同的是它们的酸性氨基酸残基的含 匀浆30秒钟，匀浆液2,000g离心15分钟，收 量也很高 （20-30务）。碱性和酸性氨基酸的 集沉淀。以上匀浆一离心步骤再重复 1次，得 含量加在一起占HMG蛋白质氨基酸含量的一 到洗净的染色质[410 半左右5,‘11,13]C 目前关于HMG蛋白质的功能和作用争论 实 验 方 法 很多。过去认为它们主要是一种染色体的结构 ～（）0.35MNaCl从小牛胸腺染色质中 蛋白，但是近来有越来越多的证据说明它们与 提取HMG蛋白质 将小牛胸腺染色质沉淀 基因活性有关。为了研究HMG蛋白质的结构 加到 100m10.35M NaCI-0.5mMPMSF(pH7.0) 和功能，了解它们与基因活性的关系，需要分 溶液中，刀匀浆器匀浆1分钟，匀浆液4,000g 离和纯化HMG蛋白质。本文通过通常使用的 离心巧分钟，以上匀浆一离心步骤再重复2 几种提取HMG蛋白质方法的比较，以期找出 次。 合并3次离心的上清液，量好体积，用 一种从某种组织中提取HMG蛋白质较好的方 100并TCA(W/V）调上清液到2务TCA(W/V) 法． LiatQingrongetal.:CompoarnsonofThreeMethods 实 验 材 料 inPickupHighMobilityGroupNon-histoneChro- mosomalProteins 动物 小牛胸腺 北（京红星人民公社奶 1）生物系袁洪生同志协助测定 HMG蛋 白质氨基酸组 成，谨致感谢。 牛场）三猪胸腺 北（京海淀屠宰场）。 本文于1985年5月9日收到。