四环素抗性重组鼠李糖乳杆菌构建.pdfVIP

中国生物工程杂志 四环素抗性重组鼠李糖乳杆菌的构建 郭铃孙靓 李检秀孙菲菲黄艳燕黄日波 广西科学院非粮生物质酶解国家重点实验室国家非粮生物质能源工程技术研究中心广西生物炼制重点实验室南宁 摘要将含有鼠李糖乳杆菌同源序列的自杀质粒转化到鼠李糖乳杆菌 中 成功获得 株含四环素抗性的重组鼠李糖乳杆菌 和 采用 技术鉴定重组菌株 染色体基因组上含有四环素抗性基因 生长曲线说明四环素抗性基因的插入对鼠李糖乳杆菌 的生长没有较大影响 抗性菌株 和 在含 葡萄糖的摇瓶发酵培养基发酵结果显 示 发酵 菌体密度 最大达到 和 残糖含量为 和 乳酸最高产量为 葡萄糖转化率达到 与原始 菌株没有显著区别 关键词 鼠李糖乳杆菌 自杀质粒发酵乳酸 中图分类号 鼠李糖乳杆菌 革兰氏阳 表达得到能稳定遗传的四环素抗性菌株 性菌从属于乳杆菌广泛存在于人畜肠道内是一种 本文通过对鼠李糖乳杆菌乳酸代谢途径的研究 益生菌无质粒 不能利用乳糖但可代谢单糖 选择了菌株基因组染色体上乳酸脱氢酶基因 可将葡萄糖淀粉糖化液糖蜜水解液发酵转化为乳 位置作为四环素基因插入位点并设计了含有 酸 由于菌株具有较高的工业应用价值和安全性 基因同源序列的重组自杀质粒 将重组 在乳酸工业生产上得到广泛的应用 不过由于鼠 自杀质粒转化到菌株中 李糖乳杆菌发酵过程属于常规无压力发酵因此在乳 以四环素作为筛选标记期望在鼠李糖乳杆菌中 酸发酵过程中常常遇到杂菌污染的问题 杂菌污染 形成能稳定遗传的四环素抗性为探索工业发酵乳酸 是工业发酵的一个大难题不仅浪费生产原料而且 的新工艺提供理论基础 延误生产周期大大增加了乳酸生产成本和发酵难 度 在乳酸发酵过程中出现杂菌污染时添加适量的 材料与方法 抗生素是抑制杂菌生长繁殖降低倒罐率最便捷有效 菌株与质粒 的方法但是由于鼠李糖乳杆菌本身无抗性因此需 本实验室保藏 要利用分子生物学方法对菌株进行改造使菌株获得 本实验构建 购 自 相应的抗性且具备在抗性压力下生长和发酵的能力 日本 本研究利用菌株本身同源重组的能力 将质粒 培养基与缓冲液 上的四环素抗性基因定点整合到鼠李糖 培养基 蛋白胨 酵母提取物 乳杆菌基因组染色体上使得外源基因能伴随着菌株 用于培养大肠杆菌 染色体的复制而复制并在宿主菌中进行目的基因的 培养基 葡萄糖 蛋