红藤方对体外培养大鼠子宫内膜细胞生长特性影响.pdfVIP

2009 年8 月第26 卷第4 期 天 津 中 医 药 Aug． 2009, Vol．26 No．4 Tianjin Journal of Traditional Chinese Medicine 329 红藤方对体外培养的大鼠子宫内膜 * 细 胞 生 长 特 性 的 影 响 1 2 2， 2 3 刘津翚 ，张婷婷 ，束兰娣 戴德英 ，曹 霖 （1．天津市公安医院中医科，天津 300040；2．上海中医药大学附属曙光医院，上海 200021 ； 3．上海市计划生育科学研究所，上海 200032） 摘要：[ 目的] 探讨红藤方对大鼠子宫内膜细胞生长特性的影响。[方法] 选用SD 成熟雌性大鼠建立大鼠子宫内膜 细胞培养模型。用噻唑蓝（MTT）比色法检测不同浓度不同处理方式的红藤颗粒剂含药血清作用24、48 、72 和96 h 后 对大鼠子宫内膜细胞生长的影响，用达那唑含药培养液作阳性对照。 [结果] 不同浓度含药血清培养大鼠子宫内膜细 胞相应时间后，细胞的增殖活性随含药血清浓度升高而降低，呈明显的剂量依赖性，随作用时间延长而降低，具有明显 的时间依赖性。 [结论] 红藤方颗粒剂可显著抑制大鼠体外培养的内膜细胞的生长。 关键词：红藤方；细胞培养；血清药理学；含药血清；子宫内膜异位症 中图分类号：R285.5 文献标识码：A 文章编号：1672-1519(2009)04-0329-03 红藤方和达那唑是治疗子宫内膜异位症（EM ， 鼠细胞角蛋白购自武汉博士德生物工程有限公司， 简称内异症）的有效药物之一。红藤方的前期诸多 Cell Counting Kit-8 （CCK-8）试剂为日本同仁化学研 整体动物实验表明该方可显著抑制子宫内膜生长， 究所惠赠，其余试剂均为国产分析纯。 有良好的活血清热、化瘀消癥作用，能抑制子宫内膜 红藤颗粒剂由上海中医药大学附属曙光医院中 生长；达那唑主要通过抑制下丘脑、垂体和卵巢功能 药制剂中心制备后冻干保存。达那唑由上海华联制 而发挥其治疗作用。研究通过建立大鼠子宫内膜腺 药有限公司生产（批号：020604）。 上皮细胞和间质细胞共培养模型，采用噻唑蓝 1.3 细胞培养 选用SD 成熟雌性大鼠。参考文 （MTT）比色法测定红藤方含药血清对内膜细胞生长 献[1] 中小鼠子宫内膜细胞培养方法，改良后建立大 的影响，并用阳性药物达那唑作为方法和药效的对 鼠子宫内膜细胞培养模型。大鼠剖腹后剪取两侧子 照，探讨红藤方治疗子宫内膜异位症的机制是否与 宫置于盛有磷酸盐缓冲液（PBS）的培养皿中，分离 抑制EM 发生的单元－细胞生长有关。 出内膜层，将子宫内膜置于盛有0.5％ 胰酶和2.5％ 1 材料与方法 胰蛋白酶的PBS 中，4 ℃消化1 h，室温消化1 h，其间 1.1 实验动物 健康成熟未交配过的清洁级雌性 每0.5 h 振荡 1 次，消化完成后将细胞移入2 mL 的 SD 大鼠，体质量200~220 g ，由上海计划生育科学研 培养液中，以台盼蓝（Trypan Blue）计算活细胞数，活 究所实验动物中心提供（合格证号：SCXK 沪2003－ 细胞率＞95% ，将细胞接种到24 孔无菌培养液或培 0002）。饲养条件：按清洁级动物要求饲养。经1 周 养瓶中，置于37 ℃ ，5%二氧化碳（CO ）培养箱内培 2 适应性后开始实验。分为大鼠子宫内膜细胞培养模 养待用。 型组和血清药理学实验组两部分。 1.4 含药血清的制备 采用中药血清药理学研究 [2] 1.2 主要试剂 胰蛋白酶（Trypsin