应用基因工程改良L乳酸菌株.pdfVIP

综述 纛蒸鬻蠢蓠舞藏 2006。Vo|。27．NO。11 i99意≯ of NonIlal 11 (CollegeLif色science，LiaoningUniversity，Dalian6029，Liaoning，China) Abstract：Thisanicle took andthe asthe mainlyE．coli，yeastfungus，LactobacillusRhizopusoIyzae examples acid tointroducethe andresultsof methodsin theL—lacticpurity studyprogresses geneengineering enhancing and inrecent yield years． words：L—lactic Key acid；geneengineering；Lactobacillus；E．coli；yeastfhngus；Rhizopusoryzae L一乳酸在食品、医药、化工等行业中有着特殊的应 用基因敲除的方法删除了加cA叩船、砒层、厅拈C基 用，很早就引起了人们的兴趣。人体只能吸收利用L型 因，又通过基因突变的方法使aekA基因失活，从而构 乳酸，过多食用D型乳酸会对人体产生毒害。L一乳酸 具有良好的生物相容性，因此广泛应用于医用材料，如 药物缓释材料、手术缝合线、骨折固定件等。聚L一乳酸 是生产可降解塑料的重要原料。因此可预见，将来对 氢酶的编码片段和终止子转入大肠杆菌中ldhA基因 L一乳酸的需求量将是巨大的。 的启动子的下游，替代了大肠杆菌原有的D一乳酸脱氢 目前，研究中的主要目标就是如何提高L一乳酸的 酶基因，成功构建了产L一乳酸的Sz79等多株菌株，并 纯度及产量。微生物发酵法一直是生产光学纯乳酸的 通过进一步的选育，培育出了一株L一乳酸的高产菌株 主要途径。在菌种的改良上，可采用诱变、细胞融合、基 Sz85。该菌株在只含葡萄糖及无机盐的培养基中对 因工程等多种方法。基因工程方法具有耗时短，目标明 糖的总转化率达到94％，产物中L一乳酸的含量达到 确的特点。本文主要介绍近几年该领域的研究进展。 下，以木糖作为发酵原料时，产量虽低于以葡萄糖为原 1 研究菌种及采用的方法 料时的发酵产量，L(+)一乳酸产率也较高(总糖转化率 1．1细菌中L一乳酸的研究 为82％)，光学纯度也达到了99％同。 1．1．1大肠杆菌中产L一乳酸的研究 1．1．2乳酸细菌中产L一乳酸的研究 大肠杆菌(Bck晓^施co尻)是我们最为熟悉，研究乳酸细菌(1actic 最多，了解最清楚的菌种之一。野生大肠杆菌的发酵产 酸的一大类细菌的统称。发酵产物多是混合型乳酸，同 物是混合型酸，乳酸并不是主要的产物，而且通常只产 时产生L一乳酸和D一乳酸，因此对乳酸细菌的改造思路 D一乳酸。因此对大肠杆菌的研究主要是使其具备L一乳 主要集中在抑制2d加的涪I生和提高Z砒￡的活性。 酸脱氢酶的基因(舰L)，并使D一乳酸脱氢酶基因(zd一1．1．2．1删除2如D基因的启动子使该基因失活 危D)不表达。Clark及其同事构建了一株丙酮酸甲酸裂 胁如e￡icu)中采用使fd加基因失活的方法使L(+)乳酸 解酶(p脚)和乳酸脱氢酶(f黝)基因双突变的大