油菜黄化突变体蛋白质组分析_两种蛋白质提取方法比较.pdfVIP

Techniques and Methods 技术与方法 生物化学与生物物理进展 Progress in Biochemistry and Biophysics 2010, 37(9): 1025~1032 油菜黄化突变体蛋白质组分析：两种蛋白质 提取方法比较* 1) 2) 1)** 2)** 张 蕊 刘海衡 赵惠贤 胡胜武 1) 2) ( 西北农林科技大学生命学院，杨凌712100 ； 西北农林科技大学农学院，杨凌712100) 摘要 以芥菜型油菜黄化突变体L638-y 及其野生型L638-g 五叶期叶片为材料，用IEF/SDS双向凝胶电泳技术对两种 不同蛋白质提取方法(TCA/ 丙酮沉淀法和改进的PEG 分级沉淀法)进行了比较，同时在IPG 胶条pH 范围及SDS胶浓 度选择上进行了探索与优化．结果表明，以pH 4 ～7 17 cm 的线性IPG 胶条进行IEF，11% SDS进行第二向电泳，每 350 μl 体系上样量为 180 μg，蛋白质可以得到较好的分离，2-DE 图谱质量最佳．用改进的PEG 分级沉淀法提取的突变体 L638-y 叶片总蛋白的2-DE 图谱可清晰识别的蛋白质点数目为(1235 ± 6)个，比TCA/ 丙酮沉淀法多识别出330 个蛋白质点； 用该方法提取蛋白质时，在突变体L638-y 与其野生型L638-g 叶片总蛋白2-DE 图谱上可识别出差异蛋白质点数目为190 个， 比用TCA/ 丙酮沉淀法提取蛋白质时多鉴别出100 个差异蛋白质点．由此表明，研究芥菜型油菜黄化突变体L638-y 叶片蛋白 质组变化，采用改进的PEG 分级沉淀法提取蛋白质更为简单有效． 关键词 芥菜型油菜，黄化突变体，叶片蛋白，蛋白质提取，双向电泳 学科分类号 Q51 ，Q946.1 DOI: 10.3724/SP.J.1206.2010.00176 蛋白质组技术已广泛应用于植物遗传、发育和 中高丰度蛋白，如核酮糖-1, 5- 二磷酸羧化酶/ 加 [1] 生理生态等诸多生物学领域 ．双向凝胶电泳(two- 氧酶(ribulose-1,5-bisphosphate carboxylase/oxygenase, dimensional electrophoresis，2-DE)是蛋白质组学研 RuBisCO ，占叶片总蛋白的30% ～50%)，大量存 究中分离蛋白质的主要技术之一．利用2-DE 技术 在而影响低丰度蛋白的检测．据新近报道，可以通 [10-12] 可以对生物细胞或组织全蛋白质表达进行定性或定 过 PEG 分级沉淀 、 RuBisCO 免疫耗竭柱 量的综合性分析，尤其可以揭示不同条件下蛋白质 (Immunodepletion columns)[13] 或一定浓度的钙离子 [14] [11] 表达的改变．蛋白质样品制备是蛋白质2-DE 分析 和植酸钠 等方法来解决上述问题．Xi 等 和