RNAi技术干扰Survivin基因抑制鼻咽癌细胞增殖实验研究.pdfVIP

201 1第七届西部肿瘤学术大会论文集 hsp27基因对鼻咽癌细胞增殖的作用及机制探讨 李国萍木，陈绍春木，李晓江，武要洪，何晓光 (云南省肿瘤医院昆明医学院第三附属医院头颈外科 云南省头颈肿瘤研究中心昆明650118) 【摘要】目的研究hsp27基因对鼻咽癌细胞增殖的影响及其可能机制。方法利用实时定量 hsp27，利用dxRNA干扰技术抑制S1 殖速率的变化，同时检测转录因子NF—K B的转录水平的变化，分析hsp27影响鼻咽癌细胞增殖 有显著性。(2)在CNE2细胞中过表达hsp27基因后，细胞的增殖速率明显加快，NF—KB转录 B转录 水平明显上调。(3)抑制S18细胞内的hsp27基因后，细胞的增殖速率明显减缓，NF—K B信号通路而对鼻咽癌细胞发挥明显的促 水平明显下调。结论hsp27基因可能通过调节NF—K 增殖作用，可设计针对hsp27基因的抗鼻咽癌分子治疗策略。 【关键词】hsp27；基因；鼻咽癌；增殖；机制 RNAi技术干扰Survivin基因抑制鼻咽癌细胞增殖 的实验研究 李晓江，马静，赵留芳，王涵，张楠，王虎 (云南省肿瘤医院昆明医学院第三附属医院头颈外科 云南省头颈肿瘤研究中心昆明650118) 【摘要】目的了解鼻咽癌组织中survivin的表达情况，探讨其表达程度与鼻咽癌的分期、转移 其对肿瘤细胞的抑制作用。 223 201 1第七届西部肿瘤学术大会论文集 survivin／sense shRNA组。RT—PCR检测转染后 shRNA组，阴性质粒pSIREN—survivin／non—sense 细胞内survivinmRNA变化，westernblot检测转染后survivin蛋白变化，流式细胞仪检测细胞周期 分布和凋亡率，MTT检测细胞的增殖情况。3．构建鼻咽癌裸鼠移植瘤24只，分为3组(同上)。 通过瘤内多点注射转染重组质粒，测定肿瘤生长体积、半定量RT—PCR和免疫组化、透射电镜 检测其对鼻咽癌CNE一2裸鼠移植瘤的影响并对裸鼠肝肾功进行检测。 结果1．在鼻咽癌组织中survivinmRNA表达水平并未发现各组的差异。而免疫组化发现survivin 较差异有统计学意义。x2=4．30，P0．05 2=7．62，P 显高于无淋巴结转移N。的鼻咽癌组39．4％(13／33)。两组比较差异有统计学意义(x 0．01)。 (49．9±1．55)％；转染阳性质粒组24hsurvivinmRNA和蛋白抑制率分别为：(41．58±O．63) PBS组，阳性质粒转染组s期细胞减少，G：／M期所占比例增高，出现了G：／M期的阻滞现象； MTT显示阳性质粒转染组细胞的生长减缓。3．体内实验与对照组相比阳性质粒转染组肿瘤体 积增长缓慢，第9d开始出现抑制效果，至第21d抑制作用开始减弱。差异在统计学上有显著性 质加深、分裂成块、片状，并向核膜周围边集。胞质颜色加深，密度增加，亚细胞器线粒体等 消失，是细胞凋亡较早期的微观变化；而对照组线粒体细胞器完好，胞膜完整，胞核、核仁清 晰可见。转染后重组质粒对总蛋白、丙氨酸氨基转移酶、血尿素氮、血肌酐总体影响不明显， 而天门氨酸氨基转移酶升高，推测与采血时间过程中污染，时间过长，发生溶血所致。 结论1．Survivin基因在鼻咽癌组织中呈高表达，表达程度与鼻咽癌的分期相关，与鼻咽癌的淋 咽癌细胞内survivinmRNA和蛋白的表达，改变细胞周期分布，诱导细胞的凋亡和抑制细胞的增