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不同浓度医用臭氧对大鼠骨骼肌、滑膜及软骨的影响 余斌 林庆荣 朱权 南方医科大学南方医院创伤骨，广东省广州市510515 摘要 目的 观察关节内注射不同浓度医用臭氧对大鼠骨骼肌、滑膜及软骨的影响。 方法 30只Wistar大鼠随机均分为5组，对照组注射医用纯氧，其它4组均在大鼠臀大肌、关节腔内穿刺并分别注射10μg/ml、30μg/ml、50μg/ml、80μg/ml的医用臭氧，每次1ml，1次/周，共3次。在不同时间点取活检行光镜下病理检查，观察5组大鼠骨骼肌注射臭氧10min、30min、3周后活检部位病理改变以及2天、2周、4周时软骨、滑膜细胞的变化。 结果 纯氧和低浓度（10μg/ml）臭氧对骨骼肌细胞无明显影响，高浓度（30、50、80μg/ml）臭氧对会造成肌细胞变性甚至轻度萎缩。臭氧10μg/ml组光镜下软骨、滑膜细胞未见明显异常；30μg/ml组显微镜下软骨细胞无肿胀，少量软骨、滑膜细胞增生；50μg/ml组显微镜下软骨、滑膜细胞稍肿胀；80μg/ml组软骨表面粗糙，有浆细胞浸润。 结论 浓度为30-80μg/ml的臭氧肌肉注射后会产生轻度损伤，浓度为10μg/ml的臭氧对骨骼肌没有明显损害作用；50μg/ml以上时，对软骨、滑膜细胞产生损伤， 80μg/ml浓度的医用臭氧出现组织结构破坏，30μg/ml以下的臭氧关节内注射是安全的。 关键字：臭氧 骨骼肌 软骨 滑膜细胞 骨性关节炎 骨性关节炎（Osteoarthritis，OA）是关节炎中最常见的一种疾病, 老年人多见。以关节软骨的变性、破坏及骨质增生为特征。关节疼痛和功能障碍，严重影响患者的生活质量。常用保守治疗或关节置换，前者虽然可以改善症状，但存在一定的副作用，后者虽能治愈，但是价格昂贵而且手术有风险，远期效果也不确定。因此，新型疗法的目标应包括高效、安全、简便、经济。臭氧具有良好的镇痛作用，可以灭活或抑制蛋白水解酶和炎性细胞因子，减轻炎症；同时，臭氧可以诱导产生抗氧化酶，使间质细胞和关节软骨合成增多，并抑制缓激肽的释放及炎性介质PGs的合成，从而减轻疼痛；臭氧还可以促进免疫抑制因子的释放，抑制免疫性反应。臭氧的这些作用与骨关节炎发病机制密切相关，因此，作者不由得提出这样一个假设：是否可以利用臭氧来治疗骨关节炎？本实验对此问题进行初步的探讨，了解不同浓度医用臭氧对大鼠骨骼肌、滑膜及软骨的影响。 材料与方法 实验动物 Wistar大鼠30只，体重160～220 g，复合饲料喂养（由南方医科大学实验动物中心提供）随机均分为5组，对照组注射医用纯氧，其它4组在大鼠臀大肌、关节腔内穿刺都分别注射臭氧10μg/ml、30μg/ml、50μg/ml、80μg/ml，每次1ml，1次/周，共3次。 实验仪器 臭氧发生器（Humazon? Promedic?）； Olympus光学显微镜；组织切片分析系统；550 nm分光光度计。 方法 30只Wistar大鼠随机均分为5组，对照组注射医用纯氧，其它4组在大鼠臀大肌、关节腔内穿刺都分别注射臭氧10μg/ml、30μg/ml、50μg/ml、80μg/ml，每次1ml，1次/周，共3次。在不同时间点取活检光镜下病理检查。然后分别观察5组大鼠骨骼肌注射臭氧10min、30min、3周后活检部位病理改变(HE×100)以及2天、2周、4周时软骨、滑膜细胞的变化。 具体标本取材方法：将大鼠麻醉固定于手术台上，切开皮肤及皮下组织，暴露关节囊，注意不要打开关节囊。从髌骨上囊部位注射入关节腔200 ul无菌的PBS，反复活动关节后，仔细抽取灌洗液，必要时切小切口吸取，灌洗液置-20 ℃保存备用。切取大鼠的实验侧股骨内髁、胫骨平台关节软骨，修成0.5 cm×0.5 cm×0.5 cm大小组织块，软骨标本用4%多聚甲醛固定，15%乙二胺四乙酸（EDA）脱钙2周，石蜡包埋，HE染色，观察软骨形态学的变化。 统计学处理 用SPSS10.0软件进行统计学处理，各组实验动物所有参数均数±标准差表示，组间采用方差分析，显著性t检验。 结果 注射臭氧10min后（图1），对照组与臭氧10μg/ml组的肌细胞无明显肿胀，细胞膜光滑完整，肌间隔有少量红细胞，无炎症细胞浸润。臭氧30、50、80μg/ml组的肌细胞轻度肿胀，边界稍模糊，肌间隙有少量红细胞，无明显炎症细胞浸润。注射臭氧30min后（图2），对照组与臭氧10μg/ml组的肌细胞无明显肿胀，细胞膜光滑完整，肌间隔有少量红细胞，无炎症细胞浸润。 臭氧30、50、80μg/ml组的肌细胞部分出现变性，未见明显坏死；伴有肌细胞间隙和血管内炎症细胞浸润。注射臭氧3周后（图3），对照组与臭氧10μg/ml组的肌细胞大小正常，无变性坏死细胞膜光滑完整，无细胞浸润。 臭氧30、50、80μ