冷冻切片固定液探讨.pdfVIP

， 2011年全国病理技术新进展研讨会论文汇编 (图4)，格林GS标本推出的组织固定脱水系列套装试剂固定60天的乳腺癌，结肠癌，肺 癌，卵巢癌，淋巴瘤的线性图谱其基线期，指数增长期，线性增长期和平台期理论扩增成立。 扩增图谱从左的右分别为乳腺癌，结肠癌，肺癌，卵巢癌，淋巴瘤。说明格林GS标本推出 的组织固定脱水系列套装试剂固定60天和10％中性甲醛固定60天的标本大致相同，也能较 好的保存模板基因。 本方法主要是探讨格林GS标本推出的组织固定脱水系列套装试剂固定l天，3天、7 天、15天、30天，60天能否保存石蜡包埋组织在不同固定时间内对组织中DNA保存情况。 固定60天能扩增出来，那么固定3天、7天、15天、30天应该都能扩增出。所以3天、7 天、15天、30天没有重复实验结果。通过实验本系列套装试剂，对目前实时荧光定量PCR 应用有重要意义。对病理相关基因发生突变致癌性转变，癌基因的表达增加和突变，有使用 价值。增加和突变在许多肿瘤早期就可以出现。实时荧光定量PCR能有效地检测到基因的 突变，而且可以准确检测癌基因的表达量。肿瘤相关的病毒基因等多种基因的表达检测。随 着与肿瘤相关的新基因的不断发现，荧光定量PCR技术将会在肿瘤的研究中发挥更大的作 用。 格林标本一新一代环保型病理组织标本固定脱水透明试剂在病理组织标本制作中不但 能增加对组织软化，而且渗透性更强。对组织固定的同时，兼有脱水、脱脂的兼容性。pH 值在6．5～7．0，微偏酸，对保存DNA效果良好。从实验结果看和常规制片没有多大差异。 完全可以满足某些肿瘤分子生物学研究。医院病理科档案中积存的大量石蜡包埋组织，是一 个可靠的分子生物学研究的材料来源。格林GS标本推出的组织固定脱水系列套装试剂。能 较好应用于病理组织标本；而且环保。对工作环境污染少。减少或完全替代甲醛和苯的毒害。 是值得推广的环保试剂。 113．冷冻切片固定液的探讨 中山大学附属第一医院病理科董愉梁英杰吴惠群 临床医师在进行手术过程中，经常需要术中快速病理诊断来明确组织病变的性质，如果 为恶性肿瘤还有了解肿瘤扩散的情况等，从而决定手术的方案。而术中快速病理诊断则需要 进行组织冷冻切片和HE染色，冷冻切片染色前需要进行固定。用于组织固定液有多种，本 文对哪一种固定液最适合用于组织冷冻切片进行探讨，介绍如下： l材料和方法 1．1材料选用2011年我院临床科室术中送检的新鲜组织100例，包括甲状腺、乳腺、胃、 肠、肺、脑、子宫和子宫附件等。 等。 l-3方法新鲜组织取材后，以OCT冷冻包埋剂包埋，置冷冻切片机速冻至适宜硬度，以5um 厚度连续切片，每个标本连续切片6张，分别放入以上6种固定液固定约5秒，行常规HE染 色，显微镜下观察结果。 2结果 固定液 组织结构清晰度 细胞核染色 细胞浆染色 核质对比 10％甲醛 差 差 差 差 219 201 1年全国病理技术新进展研讨会论文汇编 HE染色结果显示，经乙醚酒精固定的切片，镜下见组织结构清楚，背景干净，细胞核 呈紫蓝色，核内容物清晰可见，细胞质色彩鲜艳，核质对比清晰，与石蜡切片效果相似。经 95％酒精固定的冰冻切片，染色效果仅次于乙醚酒精，镜下见组织结构尚清晰，细胞核染色 稍欠佳，核染色质不清晰，细胞质着色比乙醚酒精稍淡。 3讨论 术中快速病理诊断中的组织冷冻切片和HE染色需要尽快完成，冰冻切片固定也要比常 规操作缩短时间，这样要求选用的固定液既能快速固定切片，又要有良好的固定效果。因此 冰冻切片固定液的选择是冰冻切片染色的关键步骤，固定的作用在于使蛋白变性、凝固、沉 淀，保持细胞、组织原有的形态结构。用于组织固定液有多种，甲醛是常用的组织固定液， 但10％甲醛溶液固定冰冻切片固定时间长，需要10分钟以上，如果仅固定5秒钟，则切片固 定不佳，组织染色无论是组织结构清晰度还是细胞核细胞质的对比染色效果都达不到要求。 丙酮固定的冰冻切片染色尚好，组织结构可见，但细胞核模糊，皱缩明显，对比度欠佳，着色 不均匀，而且组织收缩剧烈，容易掉片，不是理想的选择。甲醇固定液在冰冻切片中细胞形 态的固定作用得到肯定，细胞形态良好，但固定时间比乙醚酒精时间要长，且气味较大，且