卯时针刺对CFS金地鼠SCN内Per基因表达影响.pdfVIP

201 1’四川省针灸学术年会论文汇编 卯时针刺对CFS金地鼠SCN内Per基因表达的影响 洪肖娟，吴曦 (成都中医药大学针灸推拿学院／第三附属医院，四川成都610075) 近年来研究发现慢性疲劳综合征(chronicfatiguesyndrome，CFs)与生物节律紊乱密切相关。而视 交叉上核(suprachiasmaticnucleus，SCN)与哺乳动物昼夜节律密切相关，是控制哺乳动物产生昼夜节律 的主振荡器。其中Per基因及其编码蛋白是近日钟昼夜节律转录一翻译负反馈环路中不可缺少的基本 组成元件。我们的前期实验发现，CFs金黄地鼠表现出明显的自发性活动昼夜节律改变，其起始活动时 间及峰相位均迟后，而在卯时针刺，能影响CFS金黄地鼠自发活动昼夜节律，使CFS金黄地鼠的起始活 动时间与峰相位时间均较针刺导引前更向后延迟。那么卯时针刺对昼夜节律的影响是否是通过影响 SCN内FerlmRNA、Per2mRNA表达水平丽实现的尚没有相关报道。本实验探讨针刺的这种调整作用 在原理。 1材料和方法 1．1 实验动物：30只叙利亚金黄地鼠，，SPF级，雄性，2月龄，体重110-1409。 1．2动物驯化及实验条件：实验在成都中医药大学时间医学动物节律测试室内进行。将30只金黄地 鼠单个置于一个隔离单元内的40×22X20cm笼中饲养，笼中含直径14era的转轮。隔离单元内隔音、 暗置20：00-06：oo)。动物自由摄食饮水，动物的转轮活动与光暗同步驯养7天。全程应用小动物自 发活动记录分析系统记录分析动物自发踏动转轮的节律参数。 1．3实验分组：当动物自发性活动节律与正常光暗周期同步后，运用SPSSl3．0，将动物随机分成空白 对照组、模型组和针刺组3组，每组各10只。 处理方法：(1)空白组：在L：D(14：10)光暗制下自由活动，不予特殊处理。(2)针刺组：用冷水游泳 复合慢性束缚的方法，复制慢性疲劳综合征动物模型。CFS造模成功后，用自制固定器固定动物，选 “脾俞”、“肾俞”针刺，每次针刺15分钟，13一次，共针刺3天，针刺时间为每日卯时，即早上5：00-7： 00。(3)模型组：造模方法同针刺组。CFS造模成功后，于每日卯时，用自制固定器固定15分钟，固定方 式、时间同针刺组，不予其他特殊处理。 1．4标本采集：于针刺第3天治疗结束后，三组动物立即取样。将动物用乙醚轻度吸入麻醉断头，切取 含SCN的脑组织，用锡箔纸包裹好，迅速放入液氮中贮存。 l，5 TACTCCTCATr(2)总RNA提取：将20rag组织块，剪碎后加入ImlTrizol的EP管中匀浆。室温放置 离心lOmin。移去上清液，加入lml 弃上清。再用离心机瞬时离心，小心吸尽液体。开盖干燥RNA沉淀5-10min，加入20—DEPC水溶解， ·131· 2011’四川省针灸学术年会论文汇编 RNAS water 6一； Ij,1，Oligo(dT)primer(0．2∥一)l¨l，deionized buffer In— ②瞬时离心，70℃预处理5min，冰上冷却。③再依次加入：5×reaction4止，Ribonuelease dNTP Reverse hibitor(recombinant)(20u／ixl)lIxl，10mMmix2山，RevertAid(tin)M—MuLVTranscriptase (200u／jzl)1IA；④瞬时离心。⑤20℃10min，42℃60rain，70。C10rain，置于．20。C冰箱保存备用。 10s；65℃，30s；40。C，30s。 1．6数据记录与分析：全程应用小动物自发活动记录分析系统和美国Clocklab数据采集分析系统自动 检测与记录每只动物