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利用组织培养方法研究广藿香根系分泌物的自毒作用 李玲梅，李明* (广东药学院 中药学院, 广东 广州 510006) [摘要] 研究广藿香组培苗根系分泌物的自毒作用，为探讨广藿香根系分泌物与其连作障碍关系密切提 供依据。本文以组培苗为材料，应用组织培养技术分析了广藿香根系分泌物对广藿香组培苗生长、膜脂过 氧化及抗氧化酶（CAT、SOD、POD 酶）、苯丙氨酸解氨酶活性及MDA 、过氧化氢、总黄酮含量的影响。 结果表明，在根系分泌物（0.5g/ml-1g/ml ）的胁迫作用40 天后，组培苗的株高、根长和鲜重分别比对照降 低了 30.46%-48.85%、36%-100%、68.42%-86.84%；过氧化氢酶（CAT ）活性降低 12.73%-37.45%、超氧化 物歧化酶（SOD）增加3.25%-10.65%、过氧化物酶（POD ）增加201.16%-177.91% ，苯丙氨酸解氨酶（PAL ） 降低了 12.44%-8.29%。随着根系分泌物处理浓度提高，过氧化氢（H O ）和丙二醛（MDA ）含量比对照 2 2 分别增加 52.47%-116.26%、7.22%-132.05%，总黄酮含量减少 64.54%-24.55% 。由结果看出随着广藿香根系 分泌物浓度的增加，对其生长的抑制作用增大，并显著影响其膜质过氧化水平。推测广藿香根系分泌物可 能是导致连作障碍的主要原因之一。 [关键词] 广藿香、根系分泌物、化感和自毒作用，组织培养 广藿香Pogostemon cablin(Blanco)Benth ．为唇形科刺蕊草属植物，以干燥地上部分入药， 其性辛、微温。具有芳香化湿，开胃止呕，发表解暑的功效[1] 。在广藿香栽培生产中发现， 广藿香存在连作障碍现象，对其产量和品质产生影响。造成连作障碍的因素种类繁多，极其 复杂。植物化感作用中特殊形式的自毒作用是发生连作障碍的重要因素之一。本文以广藿香 组培苗为材料，应用组织培养技术研究广藿香根系分泌物对其组培苗的自毒作用，以及对萝 卜和广金钱草的化感作用，为广藿香连作障碍机制及科学合理种植提供科学依据。 1 材料与方法 1.1 实验材料及主要仪器 广藿香组培试管苗（Pogostemon cablin(Blanco)Benth ．）；萝卜种子（Raphanus sativus ）； 广金钱草种子[Desmodium styracifoliurn(Osb.)Merr]；SW-CJ-1FD洁净台（上海博迅实业有限 公司医疗设备厂）；HWS-288恒温恒湿培养箱（宁波江南仪器厂）；KYC-100B摇床（上海福 玛设备有限公司）；紫外分光光度计（岛津，日本）。 1.2 实验方法 1．2.1 根系分泌物水提液的制备： 取 5 株长势基本一致的广藿香试管苗，接种在装有 30 mL生根培养基的组培瓶中培养， 培养室温度为(24±1)℃，每天照光 12 h，光照强度 2000 lx。40 d 后，收集上述培养过一 代广藿香生根苗的培养基，在无菌洁净台中，加入等体积无菌水，放置摇床（70r/min）中 振荡 48 h，0.45μm 的微孔滤膜抽滤，得根系分泌物水提液母液。设 3个处理，根系分泌物 与蒸馏水(V:V)的比例为0：10、5：5、10：0，分别用 CK、E W 、E W 表示。 5 5 10 0 1.2.2 化感实验 用萝卜种子和广金钱草种子做生物测定，试验前用 30℃的水浸种 24h，经 0.2%的高锰 酸钾消毒 2min 后，放入铺有双层滤纸的培养皿（直径 90mm）中，每皿 50 粒，3 个重复,每 皿加入 3ml相应水提液。置于培养箱中（白天 28℃,晚上22℃）进行变温培养，在种子萌发 过程中保持发芽床湿润，每天观察发芽情况，以胚根露出种皮 1-2mm即为发芽，第 3 天统计 发芽势，第 5 天统计发芽率。分别于第 1、5、10、15 天测定胚根长和株高。 1.2.3. 广藿香化感自毒实验 23 准备 15 个培养瓶，每个瓶加入生根培养基（1/2MS+IBA0.2mg/L）20m