耐辐射球菌ddrO基因缺失突变株构建与ddrO基因功能研究.pdfVIP

antimicrobial were peptide(AP)codinggenes synthesized and artificially cloned intovector toconstructarecombinationnamed pET32a plasmidpET32AP whichcontainasix—Histidine wastransferredtoE．coli tag．PlasmidpET32AP BL21．SDS—PAGEwascarriedoutafterinducedIPTG．ResultS by demonstrated thatwehavesucceededtoconstructa vectorPET32a-H2635of expreSSion antimicrobialRecombination wasobtained peptide． protein byN—affinity enterokinasewasusedtorecoverthe chromatography．And naturestructureof AP． Resultdemonstratedthatrecombinationantimicrobialcould peptide inhibit ofE．coli． growth wordsAntimicrobial Key peptide，Recombinant Antimicrobial activity 杜邱孙晓宇何彬彬马云陈小卫苏泽红廖端芳何淑雅t (南华大学药学与生命科学学院生物化学与分子生物学教研室湖南衡阳421001) 目的：耐辐射球菌(Deinococcus 的主要候选基因，可能参与DR的DNA损伤修复途径，在DR的DNA损伤修 复过程中发挥重要作用。目前ddrO基因的具体功能不清楚。本研究拟检测耐 辐射球菌在抵抗辐射和氧化压力的过程中，预测的转录调节子DdrO(DR2574) 是否发挥了作用。探讨ddrO基因与耐辐射球菌辐射抗性之间的关系以及该基 因的功能。 方法：．利用基因体外三段连接和体内同源重组的方法对耐辐射球菌进行DRddrO基因全 基因缺失突变株构建，分析紫外辐照和H202处理后DR的野生株、基因缺失突变 株的生存率等数据，初步研究ddrO基因在DR菌体内的生物学功能。 突变的阳性菌落，经鉴定成功构建了ddrO基因缺失突变株；ddrO基因被突变 以后，ddrO基因缺失突变株的生长速度比野生型DR有所降低；ddrO基因缺 失突变株在紫外辐照和过氧化氢处理下的的存活率均低于野生型DR菌株及未 加处理的突变株的存活率，其差异均有统计学意义(尸O．05)。 结论：成功构建了DRddrO基因缺失突变株，ddrO基因缺失导致DR生长复制抑制、 DNA损伤修 紫外辐射抗性和抗H202氧化能力降低，说明ddrO基因功能与DR 复能力相关。 关键词：耐辐射球菌；ddrO基因；基因缺失突变；DNA损伤修复 }通讯作者：何淑雅，教授，博士。E·mail：skyh