南丰蜜桔果实贮藏期间果皮蛋白质差异表达双向电泳的分析.pdfVIP

南丰蜜桔果实贮藏期间果皮蛋白质差异表达的 双向电泳分析 陈虎1，何新华1≯，罗聪1，李明娟1，邓立宝1，胡颖1 (1广西大学农学院，南宁530004；2广西作物遗传改良生物技术重点实验室，南宁530007) 目的与意义南丰蜜桔是我国优良的宽皮柑桔良种之一，已有1300多年的栽培历史，并享有“桔 中之王”的美誉。f12005年打开国际市场后，对保鲜技术有了更高要求，而南丰蜜桔在采收后因为 个小、皮薄、表面积相对较大，果实更易出现失水萎蔫，果实腐烂等现象，导致品质下降，降低经济 效益。目前，国内对南丰蜜桔果实采后和贮藏生理进行过研究，未见有对南丰蜜桔果实采后和贮藏 分子机理研究的报道。目前，蛋白质组学成为后基因组时代的重要的研究手段，而双向电泳作为一 种快速、简单、高效分离多个蛋白点的方法已广泛应用于蛋白质组学研究。本试验将通过双向电泳 技术分析，探讨南丰蜜桔采后贮藏过程中的蛋白质组变化，从蛋白质水平探讨南丰蜜桔的贮藏保鲜机 理，为南丰蜜桔采后保鲜提供理论依据。 材料与方法 以无病虫害、成熟度基本一致的南丰蜜桔果实为试验材料，放置在温度25℃、相 对含水量60％的培养厢内，以0天为对照，放到果皮萎焉出现褐色为处理(重复三次)。采用酚抽法提 取果皮总蛋白，用Bradford方法进行蛋白质样品浓度的测定，根据标准曲线对上样量进行定量。第 一向等电聚焦和第二向电泳参考BIO-RAD公司说明书进行。电泳结束后，采用银染染色法进行染色。 凝胶脱色后进行图像扫描，采用PDQuest软件软件进行分析。 结果与分析对酚抽法提取南丰蜜桔果皮总蛋白质进行改进，得到易溶解，2-DE图背景色干净 000 的蛋白。优化了双向电泳体系为17 4．7)，上样量为300此，总聚焦为68VHr时进 cm的胶条(pH 行银染染色为宜。胶图分析结果表明，对照共检测到分离的蛋白点965(4-34)个，处理共检测到分离 的蛋白点l 的平均匹配率为78％。在南丰蜜桔采后处理的2．D图谱中分离得到的蛋白点数量有所上升，原冈可 能是由于南丰蜜桔贮藏期间较多的蛋白质表达。在南丰蜜桔果皮对照和处理的蛋白质组2-D图谱上 26．7嘲个蛋白点下调表达。其中5个蛋白点在对照中几乎没有表达。我们推测，这些蛋白在南丰蜜 桔采后贮藏过程中协同发挥作用，使果实内发生一系列的生理生化变化，从而使果实失水并发生病 害。对南丰蜜桔采后和贮藏5天后的果皮蛋白质组的的2．D图谱Master胶进行统计，第一向IEF分 6～6．5之间占总蛋白点数 离的蛋白点主要集中在pH5．5～6之间，占总蛋白点数的28．8％，其次是pH 的23．6％，pH5～6．5占总点数的71．7％，而酸性端和碱性端的蛋白分布相对较少，分别占总蛋白点数 的6．5％和8．1％。第二向SDS．PAGE分离的蛋白点主要集中在分子量39．2～66．2kD之间，占总蛋白点 数的31．5％，其次是26．6～39．2kD之间的蛋白点，占总蛋白点数的27．9％，97．4kD以上和21．5kD一 下的蛋白相对较少。说明南丰蜜桔果皮蛋白多为弱碱性中等分子量的蛋白。对两块胶蛋白点体积值 (Vol％)之间的线性关系分析表明，南丰蜜桔采后和贮藏后的果皮间差异蛋白点线性相关系数高于 O．88，说明这471个蛋白点相似度很高的，在两块胶中质和量上差异不大，说明本研究结果具有很好的 重复性。 关键词：南丰蜜桔；果皮：差异蛋白质组学 基金项目：柑桔优势品种繁育及其高效栽培关键技术研究(2008DFA30900)资助 Tel：0771-3270184 。通讯作者E-nmii：honest66222@163．coin 134