祛风宣痹方对哮喘豚鼠p38+MAPK信号通路影响.pdfVIP

祛风宣痹方对哮喘豚鼠p38+MAPK信号通路影响.pdf

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第十五次全国中医肺系病学术交流大会 论文集 f5】冯淬灵,武维屏,络病理论与慢性阻塞性肺疾病气道重塑.北京中医药大学学报,2003,26 4 :75.76 f616冯淬灵,COPD大鼠模型气虚血瘀痰阻证评价.中国中医药信息杂志,2009,16 8 :39-40转5l 【71冯淬灵,金焱,武维屏,庞宝森,武红莉,黄秀霞,万霞,益气活血化痰方对慢性阻塞性肺疾病模型大鼠肺功能 的影响.北京中医药大学学报,2005,28 6 :39.42。 『81冯淬灵、金焱、武红莉、武维屏,益气活血化痰方对慢性阻塞性肺疾病模型大鼠肺组织病理学的影响,中国中医药 信息杂志,2007,14 12 :34.36 祛风宣痹方对哮喘豚鼠p38MAPK信号通路的影响 史锁芳刘丽黄辉 南京中医药大学附属医院 江苏南京:210029 摘要:目的探讨祛风宣痹方 平哮合剂 对支气管哮喘的作用机理。方法:用卵蛋白致敏豚鼠 MAPK磷酸化 测各组豚鼠肺组织匀浆中p38磷酸化蛋白表达量.。结果:两种检测方法均显示,p38 蛋白水平在模型组中有明显的增加,地塞米松组、中药高剂量组和低剂量组p38MAPK磷酸化蛋白水 平低于模型组,且高剂量组蛋自水平低于低剂量组。结论:祛风宣痹方 平哮合剂 有效治疗哮喘 MAPK信号通路的表达密切有关,且其抑制作用呈现剂量依赖性。 的作用与抑制哮喘豚鼠p38 关键词祛风宣痹方;哮喘;p38MAPK信号通路;实验研究 祛风宣痹方 平哮合剂 是我院治疗支气管哮喘 风痰阻肺证 的有效院内制剂…。实验研究 表明,其对组胺引起的气道高反应性有明显降低作用旧1,能显著延长哮喘豚鼠的诱喘潜伏期,可显 MAPK 著提高哮喘豚鼠BALF中T淋巴细胞凋亡率¨1。本实验观察祛风宣痹方对实验性哮喘豚鼠p38 信号通路的影响,现报告如下。 1 材料与方法 1.1实验动物:2月龄健康雄性鼠豚50只,体重220—3009,由南京江宁青龙山动物繁殖场提 型组、中药复方大剂量组、中药复方小剂量组、地塞米松组,每组10只。实验前分笼饲养于安静室 内,饲养1月后,豚鼠体重增长至300—5009,开始哮喘造模。 1.2实验用药:“祛风宣痹方” 麻黄、海风藤、瓜萎、薤白、僵蚕、广地龙、蛇床子等 由 100片 由上海信谊药厂有限公司提供,生产批号:100502。 酸地塞米松片 0.75mg 1.3主要试剂:卵蛋白 OVA 冻干粉由上海伯奥生物科技有限公司提供,生产批号101008; MAPK Phospho兔单克隆抗体 fj—actjn鼠单克隆抗体由美国Sigma公司提供,生产批号A3854;P38 由美国EPITOMICS公司提供,生产批号1229-1。 1.4主要器材:超声雾化器由南通杰话电器制造公司提供,型号KCW一5’rD;紫外一可见分光光 度计由尤尼柯仪器有限公司提供,型号Uv一2100:垂直电泳槽、转膜系统及电泳仪均由美国Bio—Rad 4、170-3848、PowerPac200/HC/3000。 公司提供,型号Mini—PROTEAN 1.5豚鼠造模:运用卵蛋白致敏和攻击法造模H1,分为致敏和激发两个阶段:A致敏阶段:造模 第1天,每只豚鼠腹腔注射配置好的lO%亘g白蛋白生理盐水溶液lml,正常组以生理盐水处理动物。 B激发阶段:造模第15天及第24天,用超声喷雾器喷1%卵白蛋白生理盐水溶液 雾粒直径3—5微 米 对豚鼠进行诱喘,将除正常组外的余组豚鼠逐只放入不完全封闭的有机玻璃箱 320mm×260mm× 200mm 内,接超声雾化器的呼出管,任动物自行吸入1%卵白蛋白生理盐水30s诱发其哮喘发作,当 豚鼠出现出现呛咳,呼吸加深加快,点头运动,抽搐,跌倒等症状时,表示诱喘成功。 1.6给药方法:各组均从激发阶段第一天 即造模第15天 诱喘成功后30分,灌胃给药 中 药煎剂浓度为2.99/m1。正常组与哮喘模型组用2毫升生理盐水灌胃,中药祛风宣痹方高剂量组按 稀释1倍后按该浓度灌胃;地塞米松组按lmg/kg,临用前用蒸馏水配成0.2mg/ml浓度;正常组与 ·259· 第十五次全国中医肺系病学术交流太套 论疋集 小时,再次诱发,诱发后24小时内处死豚砒,留取标奉。 1 7免疫组化:肺组织石蜡切片进行常规脱蜡本化后,置干蒸馏水中浸泡,取出,^卜Ⅵ片组 织周围的液体滴加封闭血清以封闭石蜡切片与抗体问的非特异性反应,蒸馏水水洗,PBS冲洗后, 滴加各待测蛋白的一抗于绍织1-.孵育后,继而滴加相应的二抗,PBS洗涤,D^B显色,封片.镜检。 1 8Westernhlot l 8l总蛋白提取:敷液鲺中保存的豚鼠肺组织标本,r4C解冻后称重,每20 rag组绒加八 150 250u】裂解液.川玻璃匀浆器匀浆,充分裂解后,1X

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