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缺刻缘绿藻甘油-3-磷酸酰基转移酶基因克隆及原核表达 欧阳珑玲，周志刚 上海海洋大学水产与生命学院，上海高校水产养殖E一研究院，上海201306
摘要：甘油-3-磷酸酰基转移酶 G3PAT 为酰基转移酶家族成员之一，主要催化甘油一3一磷酸甘
油骨架聍l的酰基化反应，可存在于内质网、叶绿体和线粒体中，在三酰甘油 TAG 和磷脂
酰甘油 PG 合成中起重要作用。基于Ostreococcus
莱茵衣藻 GenBank登录号：1座机电话号码 的G3PAT氨基酸保守序列，根据缺刻缘绿藻密码子的
偏好性设计一对简并引物，以缺刻缘绿藻cDNA为模板进行PCR扩增，获得一321bp扩增产物，
经序列分析，它与莱茵衣藻的G3PAT氨基酸序列有75％的同源性。利用SMARTRACE技术扩增得
到其5’一端和3’一端cDNA序列后，与所得片段序列拼接获得长度为3284bp的缺刻缘绿藻甘
bp，3’一UTR序列长354bp且有明显的ployA+尾，开读框架 ORF 序列长1305bp，编码434
个氨基酸。胍彩黝，基因DNA序列长5773bp，有7个内含子，8个外显子，且均符合“GT—AG”
剪切原则。用NotI／肋DI和NotI／胁口rIII两组限制性内切酶分别对缺刻缘绿藻基因组DNA
进行双酶切，并以一片段大小为311
结果表明该基因以单拷贝形式存在于基因组中。使用生物信息学手段分析MiG3PAT氨基酸序列，
结果显示该酶含有推测的磷酸酰基转移酶结构域PlsC，原核膜脂蛋白结合位点和一个带有63个
氨基酸残基的叶绿体转运肽，由此推测所获得的MiG3PAT为核基因编码的叶绿体膜内结合蛋白，
存在于叶绿体中。使用实时荧光定量PCR对缺氮／氮恢复培养条件下MiG3PAT基因转录量进行分
析，结果表明在缺氮培养条件下MiG3PAT基因转录量随时间增加无显著性变化 P O．05 ，而转
入完全培养基8h后基因转录量显著升高 K0．01 并在48h后维持在正常转录水平。该转
录量的变化趋势与氮限制培养条件下缺刻缘绿藻内质网型G3PAT推测转录量变化趋势相反，同 coli IPTG诱导后获得分子量大小约为
BL21 DE3 pLysS表达菌株中，在30oC培养条件下，经ImM
础，并为氮限制条件下缺刻缘绿藻脂类合成代谢探讨提供理论依据。 市教育委员会科研创新项目 09ZZl67 、国家海洋局可再生能源专项基金及海洋生物学重 点学科 J50701 资助项目。 21
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