人参皂苷Rb-1对微血管自律性舒缩活动与大鼠心肌微血管内皮细胞内钙瞬时变化影响.pdfVIP

_第四届京津冀一体化畜牧兽医科技创新研讨会 论文集 _暨“瑞普杯”新思想、新方法、新观点论坛 兽医学部分·基础性研究 人参皂苷Rb一1对微血管自律性舒缩活动 及大鼠心肌微血管内皮细胞内 钙瞬时变化的影响 王鑫1，冯波”．李平丽1，孙向婉1，穆样1，董虹“ 1．北京农学院兽医学 中医药 北京市重点实验室．北京102206 2．中国农业大学动物医学院，北京100193 摘 要：本文探讨人参皂苷Rbl GinsenosideRbl，GSRbl 对人合谷穴区皮内微血管自律性舒缩活 rdlalmicroVascularendothe|iaI 动振幅以及大鼠心肌微血管内皮细胞 Rafmyoca ceIls，RMMECs 内 游离钙离子瞬时变化的影响。利用激光多普勒血流测定仪结合离子导入仪检测微血管自律性舒绩活 离子的变化。试验确定了能够引起RMMECs胞内游离钙离子释放的ATP的最低量为O。5ug／mL， GSRbl 孵育后，能够刺激胞内游离钙离子释放的ATP的最低量升高为1．5“g／mL。提高微血管自律运动振 《ATP的刺激量由O．5ug／mL升高到1．5H9／mL 。 关键词：微血管自律运动；GSRbl；ATP：Ca“；RMMECs 微血管的自律运动是一种具有独特的振幅和频率的复杂 讨中药治疗疾病的机制。 的似周期性的生物波”1。众多疾病状态下微血管自律性舒 1材料和方法 缩活动减弱，如急性和长期慢性炎症㈦”、糖尿病川、高血 1．1主要试剂 压I“和肥胖患者‘6’等。有研究显示中药成分。7]、电针‘…、半 nuo—3AM购自美国Invi￡rogen，P】u∞nicF—127购自美 导体激光旧1等刺激均可提高微血管自律性舒缩活动的幅度。 醴明提高微血管自律运动幅度对治疗疾病具有潜在的意义。 因子兔抗鼠一抗、F17rc标记二抗购自北京博奥森 货号bs一 微血管自律性舒缩活动能评估微血管内皮的功能状态”…，而 微血管内皮细胞的功能异常会直接导致各种心血管相关疾病 直径lOmm的小坑 购自美国Coming，L一谷氨酰胺购自美国 的产生。 si肿a，胰蛋白酶、胶原酶Ⅱ型冻干粉购自美国GjB∞公司。 迄今为止，中药及其有效成分的作用机制研究大多集中 1．2微血管自律性舒缩活动的测量 在血液流变学…“1和对心血管系统的保护作用‘”_”1方面。 解剖学位置结合穴位定位仪找到志愿者手阳明大肠经上 而本研究旨在通过研究中药成分GsRbl对微血管自律行舒 的合谷穴作为待测穴位，并标记。用生理盐水溶解GsRbl 缩活动振幅以及微血管内皮细胞对外界刺激的耐受能力来探 8aIineNs 作 终浓度为50斗g／mL ，以导人生理盐水 NoⅡn ll 基金项目：国家白然科学基金 3“01850 ；北京市教委科技面上项目 KM2012l0020008 ；北京市自然科学基垒 座机电话号码 ；北京市科技新 药物导人穴位；激光多普勒血流监测仪 瑞典Pe五med公司主 星 Z1座机电话号码814041 。 作者简介：王鑫 1992一 ．男，江西靖安县人，硕士研究生，研究方向： com JI【L管血流灌注量 Pu 。以Pu。。一Pu…表示微血管自律性 中兽医药及疾病防控方向。Emall：wiIb跏xln0217@163 通讯作者：董虹，副教授，E—mailIdong Ion萨23@163com。 舒缩活动振幅。采用Perimed提供的统计软件，从每位自愿 188 第四届京津冀一体化畜牧兽医科技创新研讨会 兽医学部分·基础性研究 暨“瑞普杯”新思想、新方法、新观点论坛 I论文集 者导药前后微血管舒缩活动振幅图像中分别选取5段数据计 M如l，lmM，用NaOH调PH值为74 缓冲5分钟后使用激光 Ad— TCS Suite 算导药前后振幅平均值 PU。。一Pu。，。 ÷5]。 共聚焦显微镜 kicaSP：5，kicaAppUcation 1．3 RMMECs的原代培养及鉴定 vancedFluorescence，40× 检测。 1．5数据分析 lO日龄SD大鼠，脱颈处死，取H 左心室壁，剥离心内膜 和外膜．于0．2％的Ⅱ型胶原酶中剪碎，37℃消化20min，终止微血管自律性舒缩活动振幅的变化用sPssl6．0统计学 软件处理，数据用平均值±标准差 x±s 表示，两组间比较 消化过200目筛，1500转离心6min，接种于6iL板内，4h后更 换培养液，刮除形态不规则的细胞，待细胞长至80％汇合时 采用t检验，以P O．05为有统计学差异。 传代。第二次传代将细胞培养在培养碟底部的坑内，待细胞 2结果 贴壁生长20小时后进行试验。形态学结合免疫荧光法鉴定 2．1 GSRbl对微血管自律性舒缩活动振幅的影响 细胞的纯度。倒置显