金花茶叶子提取物对人单核细胞白血病细胞株U937细胞抑制作用的研究.pdfVIP

· 1382 ‘ 光 明中医2014年 7月第 29卷第7期 CJGMCM July2014．Vol29．7 【实验研究 】 金花茶叶子提取物对人单核细胞 白血病细胞株 U937细胞抑制作用的研究 何甘霖 王春燕 谭 获 郑丽霞 于宝丹 李宏伟 摘要：目的 观察金花茶叶提取物对人单核细胞白血病细胞株U937细胞抑制的作用。方法 采用CCK_8(ce11CountingKit) 试剂盒测量不同浓度的金花茶叶提取物刺激白血病细胞U937细胞24—72h，分5个时段，观察各浓度吸光度值(opticaldcnsitv，OD 值)、对应增殖抑制率、最佳药效时间。结果 CCK一8测试显示，800ug／ml浓度金花茶叶提取物刺激 白血病细胞株U937细胞36h、 48h、60h、72h，与正常组细胞数比较，OD值和增殖抑制率的差异均有统计学意义(P0．05)；当浓度为400ug／ml时，在48h、60h，OD 值和增殖抑制率的差异均有统计学意义(P0．O5)，表明最佳药效时间在48h一60h之间。结论 高浓度的金花茶叶提取物对人单 核细胞白血病细胞株U937细胞有抑制作用。 关键词：金花茶叶子；提取物；白血病；U937细胞 doi：10．3969／j．issn．1003—8914．20l4．07．015 文章编 号：1003—8914(2014)．07．1382—03 白血病是危害中国居 民的主要恶性肿瘤之一…。 东京 ，日本)获得 ，培养于含有 10％热灭活小牛血清 抗 白血病的药物呈 明显 的剂量与效应关系 ，但 随着药 的 RPM I1640培养液 中，37oC、5％CO2，饱 和湿度 条 物剂量的增加 ，其毒性的发生率也明显提高 ，致使抗 白 件下培养 。选取对数生长期细胞进行实验。 血病的药物在临床中的应用受到 了限制。因此 ，探索 1．2 方法 疗效确切 、副作用小、价格低廉的药物将是治疗 白血病 1．2．1 体外细胞 增殖抑 制实验 CCK一8试剂盒检测 的重要研究方 向。山茶属植物抗肿瘤活性的研究 中发 细胞生长情况 ，将 U937细胞在 37qC、5％CO2条件 现 ，5％金花茶叶和 5％的金花茶浓缩液有抑制 DEN 下 ，培养于无血清培养 液中 8h。细胞 同步后离心 ， 致大 鼠肝癌作用 。金花茶种子乙醇提取物 、正丁醇 掉无血清培养液，再加入 10％培养液 (10％胎牛血清 部分和水溶部分对 U937细胞增殖均有抑制作用 。 +90％1640培养液)种于96孔培养板 ，每个孔细胞数 本实验采用 CCK一8试剂盒测量 以金花茶叶提取物刺 为3×l0 ，后加入等容量系列浓度的待测样 品，每个 激 白血病细胞株 U937细胞后的吸光度 OD值 、对应增 浓度设 6个平行孑L(6个副孔)。预实验设 5个药物浓 殖抑制率、最佳药效时问等。 度组 (800ug／ml，400ug／ml，200ug／ml，100ug／ml，50ug／ 1 材料与方法 m1)，分别于 24h及 72h测量数据 。预实验后 ，因金花 1．1 材料 CCK一8试剂盒是 由 日本同仁化学研究所 茶叶提取物水溶剂仍有细微颗粒 ，后续实验金花茶 叶 开发的检测细胞增殖 、细胞毒性的试剂盒 ，试剂盒中采 提取物予 4％二 甲基亚砜 (DMSO)(4％DMSO+96％ 用该研究所开发 的水溶性 四唑盐一WST一8。试剂为瓶 蒸馏水 )溶解 ，为避免 DMSO对 白血病细胞 U937的影 装淡红色溶液 ，即开即用，不需要放射性 同位素和有机 响，加入 DMSO组 (5％DMSO对 照组)。经初步筛选 溶剂 ，具有检测快速 ，可以测定较低细胞密度 ，对细胞 后确 定共 设 5组 ，实验 组药 物 的终浓 度 分别 为 毒性小等特性。 800ug／ml，400ug／ml，200ug／ml，DMSO对 照组 加 入相