极地环境嗜冷菌新种的发现.docVIP

极地环境嗜冷菌新种的发现两极地区的嗜冷菌被认为是研究细菌地理学的理想对象。目前的研究表明，许多细菌的属在南、北两极都有存在，但在种的水平上还没有发现同时存在于两极的种。需要我们对更多的极地嗜冷菌进行研究，以确认两极地区是否存在相同的种，增加细菌地理学知识。嗜冷菌作为极端微生物中的一员与其它极端微生物一起界定了生物圈的范围。Breezee等研究从北极海冰分离的新种Psychromonas ingrahamii时发现，该菌能在-12℃的温度条件下生长繁殖，代时为240h，这一温度是目前用生长曲线验证过的生物的最低生长温度。随着更多嗜冷菌新种的发现、研究的深入和新方法的采用，生物生长的下限温度相信将会不断被改写，极端微生物对地球极限环境的适应性也将不断被认知。嗜冷菌被星际生物学家(Astrobiologists)认为是探索地外生命（Exobiology）的模式生物。提高对从极区海冰中分离的嗜冷菌的认识，可以为探索地外生命积累经验。更重要的是，嗜冷菌的特殊代谢产物和途径具有提升生物技术能力和建立新型生物技术的巨大前景。两极地区存在着众多的特殊极端自然环境，生活于其中的嗜冷菌不仅要适应寒冷，还要耐受其它的极端条件，如深海、海底沉积和深冰芯中的高压，海冰中的高盐，冰雪表面的强辐射以及岩石环境的干燥和低营养。这也造就了极地嗜冷菌的多样性，成为嗜冷菌新种的主要发现地。在过去10年发现的71个新种、18个新属中，有55个新种、15个新属来源于极地。这些嗜冷菌来源于极地海洋沉积、海水、海冰、冻土、湖泊等环境。我国极地微生物的研究，始于“八五”公关 项目“南极菲尔德斯半岛及其附近地区生态系统研究” 专题对长城站所在的菲尔德斯半岛及其附近地区的微生态调查。在“十五”期间这一领域研究逐步展开，一些项目也相继得到资助。这些项目的实施将使我们对极地微生物多样性、与环境变化的相互关系及其潜在的应用价值等有更多的认识。而相对于国际上从极区发现大量的嗜冷菌新种属，我国在这方面的工作显得非常的薄弱，至今仅报道了一个来源于极地的新种Micrococcus antarcticus。本项目将对分离的嗜冷菌进行基于16S rDNA的系统进化分析、16S rDNA序列相似性分析和DNA同源性分析，根据多相分类原则开展分类研究，发现并描述新种，了解极地低温生境嗜冷菌的物种多样性及其资源性质，增强在极地特殊环境发现新的嗜冷菌物种资源的能力，为极地微生物这一重要资源的认识和利用提供理论依据和资源基础。从中山站站区的冻土、湖泊、潮间带采集冻土、海水、海冰、湖水、湖泊沉积等微生物学样品20份；视天气安排4~5次中山站周边的进步湖、团结湖等湖泊采集冻土、湖水、湖泊沉积等微生物学样品20份。~150g。 3）样品处理样品带回站后，立即进行处理。采集的样品分成两分，一进行嗜冷菌的现场分离，另一加15%的甘油（终浓度）冷冻作为备份样品带回国内进行嗜冷菌的补充分离。）嗜冷菌的分离样品-20℃冷冻24h，-1℃条件下富集培养后，涂布平板4℃下培养分离。获得的菌株经生长上限温度实验确定为嗜冷菌回国后将继续开展以下部分的工作，发现新种并进行系统分类研究：嗜冷菌的分离极地嗜冷菌的系统进化分析对分离自极地环境的嗜冷菌进行16S rDNA全长序列PCR扩增，所得的序列与GenBank、EMBL、DDBJ等数据库中所获得的16S rDNA序列，采用CLUSTALX1.81软件包进行多序列匹配排列，通过Treeview和PHYLIP3.62软件包推测和分析系统发育树，了解分离嗜冷菌的种属组成及其与已知种属的亲缘关系。极地嗜冷菌新种的发现应用PHYLIP3.62软件包分析16S rDNA序列相似性，选择相似性在98%以下的菌株作为可能的新种。将其与相近的已知种进行DNA-DNA杂交实验分析同源性，同源性在70%以下就可认为为新种。嗜冷菌的分类研究根据多相分类的原则，在上述分子生物学数据的基础上，结合形态特征、培养特征、核酸特征、生理生化特性、细胞脂肪酸组分分析等进行分类研究，对新种进行描述 1：南极陆地2：南大洋 3：北极陆地4：北冰洋 采集地点名称（8） 采集站位名称（9） 采集站位坐标（10） 经度： 纬度： 海拔： 采集地点环境类型（11） 菌株分离基物信息描述 土壤 类型（12） 植被（13） pH (14) 温度（15） 土层深度（16） 土壤特征（17） 沉积物 类型（18） 1：湖泊沉积 2：海洋沉积 3：其它 水深（19） pH (20) 温度 （21） 沉积柱长度（22） 沉积柱分层（23） 沉积物特征（24） 水 类型（25） 1：淡水 2：海水 3：卤水 4：其它 水深（26） 水温（27） p