菠萝SERK基因克隆表达的分析.pdfVIP

园艺学报2011，38(增刊)：2513 ahs．∽．姐 http：／／、)I懈wr ActaHorticulturaeSinica 26．com E-mail：yuanyixuebao@1 菠萝SERK基因的克隆与表达分析 马 均，何业华。，曹 莉，许文天，郭翠红，夏靖娴，陈程杰 (华南农业大学园艺学院，广州510642) comosus)体细胞胚发生体系和细胞学研究的基础上，对其体细胞胚发生类 在建立菠萝(Ananas 受体蛋白激酶(SERK)基因进行了克隆和表达分析，旨在探讨菠萝中SERK基因的存在状况、解 析其结构和表达特征。以‘神湾’菠萝胚性愈伤组织作为材料。采用trizol法提取总RNA反转录合 片段，再采用RACE方法扩增两端序列，拼接出全长。再根据拼接结果设计引物进行RT-PCR扩增 出全长。根据所得全长序列设计引物，采用实时荧光qPCR对体细胞胚诱导过程中菠萝SERK基因 (彳丛E脒)的表达量进行定量分析；同时采用原位杂交显微观察菠萝SERK基因在体胚诱导过程中 的表达模式。根据AcSERK表达模式，推测其在体细胞胚发生过程中的作用。构建AcSERK的全长 表达载体和干扰载体，以胚性愈伤组织为材料进行农杆菌介导的遗传转化，根据转基因植株的体细 胞胚发生能力以验证AcSERK在体细胞胚发生中的功能。 从菠萝中分离出3们cSERK，分别命名为AcSERKl、2、3。经ORFfinder软件分析显示，AcSERKJ『 全长2039 890 bp，包含一个长1 其蛋白分子量约为69．2 2230 875 kD， bp，包含一个长l bp的开放阅读框(ORF)，编码624个氨基酸，蛋白分子量约为68．9 232 890 pI为5．38，分子式C3074H4科5N科309IoSu。AcSERK3全长2bp，包含一个长l bp的ORF，编 码629个氨基酸，蛋白分子量约为69．6 的Blast软件进行核酸序列比对，发黝cSERK与椰子(Cocos 个基因均具有SERK基因家族保守的内含子，外显子结构。菠萝SERK蛋白与其他植物来源的SERK 蛋白具有较高的相似性，与椰子、水稻、大麦(Hordeum 组织细胞由体细胞向胚性细胞转化以及胚性细胞形成球形胚的过程中表达。说明AcSERKI、2、3在 菠萝愈伤组织细胞胚性获得和球形胚形成过程中发挥一定作用，是在体胚诱导与形成过程早期承担 一定功能的基因。 关键词t菠萝；AcSERK；克隆；表达分析 中圈分类号lS668．3 文献标识码；A 文章编号l0513．353X(2011)S-2513．01 收藕日期l201l—08一Ol t盒项目t困家自然科学基金项目l农业部引进田际先进农业科学技术重点项目(2010．(32．11) 。通倌作者(E．-midh Toh020 h。ychu|@}llom城1．comt