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磁性高分子微球在核酸分离纯化应用中的研究进展 ／白鹏利等 ·219 · 性好，并具有很强的磁响应性能。Song等口采用两步分散 样品污染，极大地限制了分子诊断技术在临床检验 中的应 聚合法，以苯乙烯为单体，甲叉丁二酸为共聚功能单体，制备 用。自动化核酸提取技术及系统的发展为分子诊断技术的 表面具有羧基的磁性微球。采用该方法制备的磁性微球分 临床应用提供了可能。目前，已有不少公司和研究机构致力 散性好、粒径均匀，在生物医学中有广泛的应用。沉淀聚合 于开发基于磁性微球分离技术的全 自动核酸分离纯化系统， 与分散聚合稍有不同，沉淀聚合不使用稳定剂，而是在其中 并取得了较好的进展。全 自动化系统可以完成样本吸取、裂 添加一些与分散剂具有亲和作用的单体使微球稳定。Mac- 解、结合磁珠、洗涤、洗脱等过程，无需传统的离心、过滤等操 kova等口幻在 甲苯 ／异丙醇的混合溶剂中采用沉淀聚合法制 作 ，并且能够有效地防止样品污染和样品间的交差污染。基 备聚 N_丙炔基丙烯酰胺磁性微球 ，研究表 明油酸改性 的 于磁性微球分离技术的全 自动核酸分离系统操作简单，便于 Fe。O4纳米颗粒有利于稳定聚合的磁性微球。 维护。 原位法是在聚合物微球 内原位生成磁性颗粒的一种制 罗氏最新产品MagNAPureLC2．0可 以从各种不同的 备磁性高分子微球的方法，该方法首先制备均一的高分子微 样本中(包括全血、包细胞、培养细胞、动植物组织、体液、粪 球，微球含有可 以结合铁、钴、镍等金属离子的基团(如 便、尿液、痰、食品等)分离纯化出高纯度的DNA和 RNA， 一 NH 、一CO0H、一OH等)，然后将高分子微球分散于铁盐溶液 1h能够处理 32个样本 。中国台湾圆点奈米技术开发有限 中，在碱性条件下得到铁的氢氧化物 ，最后通过热处理 ，得到 公司的SmartLabAssist全 自动磁珠核酸提取仪基于磁棒架 磁性高分子微球 。Ugelstad等_l。]通过原位法制备了均一的 上的磁棒吸附磁珠 ，将磁珠移至不 同的试剂槽 内，可 同时处 磁性高分子微球，并将其转化为产品Dynabead~，其在细胞 理 32个样品。科华生物的核酸提取仪采用磁珠法，实现批 分离、核酸分离纯化等生物医学领域有广泛的应用。 量化，可同时处理 96个样品，自动化操作，省时省力，保证实 验结果稳定。虽然这些仪器实现了自动化核酸提取，但单个 2 磁性高分子微球在核酸分离中的应用 样品的处理依然需要较长时间。 核酸的分离纯化在分子生物学的研究及分子诊断中具 有重要地位 。分子生物学实验 中核酸提取的质量直接关系 4 展望 到后续的PCR、测序、转化等实验的顺利进行。传统的方法 目前 ，磁性微球分离技术 已经从实验室走 向实际应用， 费时费力，而且需要使用有毒试剂，提取的纯度也不够高。 磁性微球的制备技术逐渐成熟，然而大批量生产磁性微球依 随着各种合成和修饰方法的发展，基于磁性微球的分离 然存在诸多技术难题 。虽然现有的仪器在速度和通量方面 技术在生物分离中取得了广泛的应用，如细胞、DNA、RNA、 还不尽人意，但是全 自动核酸提取系统已经成为核酸提取技 蛋白质等的分离。1997年 Hawkins等 提出了基于磁性颗 术和分子诊断技术发展的必然趋势，开发快速高通量 的核酸 粒的DNA提取技术，磁性微球在核酸分离方面的应用逐渐 提取系统是该领域研究的重要方 向。伴随着全 自动核酸提 形成新的研究热点[1 。磁性微球提取 DNA不仅具有简 取系统的开发和功能的完善，必将有力推动分子诊断技术和 单 、快速 、有效的特点，同时避免 了离心分离和大量使用有机 遗传学方法在临床诊断中的广泛应用 ，也将成为人类提高生