一起猪链球菌病的临床分离鉴定及诊治.pdfVIP

养猪 SWINEPRODUCTION(1) 20l5 一 起猪链球 菌病 的临床 分离鉴 定及 诊 治 幸文定，曾文斌，刘悦欣，左明开，王 萍 (江西农业大学动物科学技术学院，江西 南昌 330045) 中图分类号：s858．285．1 文献标志码：A 文章编号：1002—1957(2015)01—0092—02 猪链球菌病是由感染溶血性链球菌引起的，此 1．3 生化试验 病发病急、病程短、死亡率高，各种年龄和品种的猪都 用接种环将 TSA培养基上生长纯化的细菌接 可以发病，临床上常表现为猪急性败血症、脑膜炎、肺 种到生化微量发酵管中，37cc条件下培养 24h后 炎、淋巴结脓肿、慢性关节炎及心内膜炎等[11，已成为 观察结果。生化试验参考嫦 见细菌系统鉴定手册》2[】 养猪生产中的常见病和多发病，对养猪业危害很大。 提 出的方案 。 2014年9月初江西南昌某 自繁 白养猪场内保育 1．4 分离菌株PCR鉴定 猪出现散发的关节肿大和跛脚症状，少数病猪可见倒 参照文献I31设计猪链球菌 16SrRNA引物。上游 地抽搐，口吐带血色的泡沫，四肢呈划水状，病程较长 引物 P1：5一GCAGCGTA1TCTGTCAAACG一3，下游 者表现消瘦，精神沉郁，患病猪初期体温升高达4l～ 引物 P2：-CCATGGACAGATAAAGATGG一3，扩增 42℃，食欲废绝，站立困难。出现临床症状后2d内有 片段理论长度为688bp。引物由上海生工生物工程 死亡现象，发病率约为6％，不用药物治疗的情况下死 技术服务有限公司合成。采用煮沸方法提取细菌 亡率可达 50％。剖检发现，主要病理变化是以各脏器 DNA模板。反应体系 (25IxL体系)：10xPCRBuffer 出血、充血为特征的败血症。喉头、淋巴结、肺等器官 2．5txL，dNTPs(1O~mol／L)1LLL，上游引物 (10pmol／ 出血或者充血，气管、肺 内充满泡沫；脑膜有不同程度 IxL)1 L下游引物 (10pmol／IxL)1 L，TaqDNA聚 充血、出血；关节囊内有黄色胶冻样或纤维素性脓性 合酶 (5U／o~L)0．25lxL，DNA模板 1 L，ddH2018．25 渗出物；心包、胸腔、腹腔有纤维素性渗出物。笔者采 uL。反应条件：94c二【预变性5min；94℃45s，57oC 集病料后，进行了病原的分离鉴定与药敏试验，并选 45s，72℃30s，35个循环；72℃延伸 10min。PCR 用敏感药物进行临床治疗，取得了良好的防控效果， 产物经 1．0％琼脂糖凝胶电泳检测。 现将诊治方法报道如下。 1．5 动物试验 1 材料与方法 将小 白鼠随机分为 3组，2组试验组，1组对照 1．1 材料 组，每组5只。试验前小白鼠均饲养3d以证实健康 无菌采集该猪场病死猪心脏、肺脏、大脑等组 方可使用。试验组和对照组小白鼠腹腔分别接种分 织进行实验室检测。微量生化鉴定管和药敏纸片购 离菌血清 肉汤培养物和血清 肉汤，皆为0．2mL。应 自杭州天和微生物试剂有限公司，胎牛血清购 自杭 用平板稀释法计数 ，每只小 鼠腹腔接种 2xlOsCFU。 州四季青生物工程材料有限公司，胰蛋白胨大豆琼 隔离饲养观察，对死亡小鼠进行回归试验。 脂 (TSA)购 自于海博生物，胰蛋白大豆肉汤TSB购 自 1．6 药敏试验 北京希凯创新科技有限公司，TaqDNAPolymerase、 按 K～B药敏纸片的方法，选用 14种常见药物 dNTP Trans2KDNAMarker均购 自北京全式金生 对分离菌株进行药敏试验。 物有限公司，其它常规试剂均为分析纯。小白鼠购 2 结果 自江西医学院实验动物中心。 2．1 细菌分离结果 1．2 细菌分离培养 分离菌在TSA平板上分离到形态、大小比较一 将无菌采集的死亡猪心脏、肺脏、大脑病料分