弯曲杆菌诊断标准及处理原则.pdfVIP

GB/T18653-2002 前 言 本标准是依据加拿大国家动物疾病研究所的实验室操作规程，结合本国实际情况制定的，通过大量 试验，证实该方法准确可靠。 本标准的附录A是标准的附录，附录B是提示的附录。 本标准由中华人民共和国农业部提出。 本标准由全国动物检疫标准化技术委员会归口。 本标准起草单位:天津动植物检疫局。 本标准主要起草人:秦贞奎、侯艳梅、张碧波。 中华人 民共和 国国家标准 胎JL弯曲杆菌的分离鉴定方法 GB/T 18653-2002 Methodsforisolationandidentificationofcampylobactorfetus 1 范围 本标准规定了胎儿弯曲杆菌的分离鉴定方法 本标准适用于牛、绵羊、冷冻精液胎儿弯曲杆菌的检验，其他动物可参照使用 2 胎儿弯曲杆菌的分离鉴定 2.1 设备和材料 2.1门 混合气体[质量比为3.5%氧(00,10%二氧化碳(C02),86.5%氮(N,)口。 2.1.2 厌氧培养罐。 2.1.3 采样棒及吸球 2.1.4 2mL注射器，5号针头，20号针头。 2.1.5 灭菌青霉素瓶及生理盐水。 2.1.6 供常规细菌分离鉴定用的基本设备与材料。 2.2 培养基和试剂 见〔附录A(标准的附录)〕。 2.2,1 增菌运输培养基(TEM)o 2.2.2 半胧氨酸牛心浸膏培养基((CH), 2.2.3 琼脂培养基(MH), 2.2-4 疏基乙酸盐肉汤。 2.2.5 相关生化试剂。 2.3 胎儿弯曲杆菌的分离鉴定程序见附录B(提示的附录)示意图。 2.4 分离培养 2.4.1 样品采集 2.4-1-，母牛站立或六柱栏保定，用5%来苏儿消毒牛的外阴部，将采样棒的采样端插人阴道，压扁另 一端的吸球，并来回抽动，吸取阴道粘液。取出采样棒后，插人盛有3mI灭菌生理盐水的小瓶中吹吸数 次，再将采样棒放人消毒液中。 2.4.1.2 公牛六柱栏保定，用绳子固定采样侧的后肢，剪短阴筒外部的阴毛，用5%的来苏儿消毒公牛 的尿道口，将采样棒的采样端插人阴筒内，将另一端的吸球压扁并来回抽动，吸取包皮液。取出采样棒迅 速插人盛有3ml灭菌生理盐水的小瓶中吹吸数次。 2.4.1.3 样品液静置1min-2min，用灭菌注射器吸取上清液2mL，分别注人两瓶增菌运输培养基 (见附录A中A1)中，每瓶1mL。振荡混匀，尽快送至实验室。 2.4-1.4 取样品做革兰氏染色并做湿涂片镜检。也可用棉拭子荫取样品液直接涂布于含抗菌素的MH (见附录A中A3)或CH(见附录A中A2)琼脂平板上。 2.4.2 已接种样品的增菌运输培养基置37C培养72h。用直径3mm的接种环将增菌液分别划线于 两个MH或CH平板培养基上，将平板放置厌氧培养罐中，将雄内空气抽出，达到一5.5kPa时停止，充 中华人民共和国国家质f监督检验检疫总局2002一02一19批准 2002-05一01实施 Gs/T 18653-2002 人经0.22pm滤膜过滤的混合气体至负压为零，再将气体抽出和充人反复两次。将培养罐在37C培养 72h。以后胎儿弯曲杆菌均需在混合气体条件下培养。 2.4.3 观察MH,CH培养基上有无疑为胎儿弯曲杆菌的菌落，如无可弃之 如有，将典型或可疑菌落 划线于MH或CH琼脂平板培养基上培养72he 胎儿弯曲杆菌在MH或CH平板培养基上的菌落特征为:不溶血、半透明、光滑、周边整齐、圆整、直 径为1mm左右。 2.5 鉴定 2.5，， 筛选试验 2.5.1.， 取典型或可疑纯培养物做革兰氏染色、湿涂片动力观察、氧化酶试验及过氧化氢酶试验(试剂 配方见附录A中A5,A6)o 胎儿弯曲杆菌为革兰氏染色阴性，呈螺旋状或 “S,，状，一些老龄培养物可出现球状或球杆状，不形 成芽胞和荚膜，在菌体的一端或两端有鞭毛，呈特征快速螺旋状穿梭运动。氧化酶试验为阳性 5.1.2 纯培养平板用后尽快放回混合气体环境中，以备进一步做生化试验用。 5.2 生化试验 : 2.5-2.1将符合2.5.1.1条的培养物按表1进行生化试验。 表 1 胎儿弯曲杆菌