PCR-CTPP：一种基于错配技术的SNP分型方法的改良.pdfVIP

篷 锫HEREDITAS(Beijing)2011年2月，33(2)：182—188 ISSN0253—9772 WWW．chinagene．ca 技术与方法 DoI：10．3724／SP．J．1005．2011．00182 PCR-CTPP：一种基于错配技术的SNP分型方法的改 良 4 王柯 一，章金涛 ， 7 运玉霞 一，吴晓冰 一，陈阿群 一，王鹏 一，王凯娟 一，张建营 一， 代丽萍 ， 1．郑州大学公共卫生学院流行病与卫生统计学系，郑州 450001 2．河南省肿瘤流行病学重点实验室，郑州 450052； 3．郑州大学生物工程系，郑州 450001； 4．郑州大学实验动物中心，郑州 450052 摘要：为探讨两对交叉引物PCR(PCR—CTPP)技术的原理并提高SNP分型的准确性，以人类MTHFR基因1298 位点突变为例，通过设计合理的5j物、优化51物终浓度及复性温度等重建 PCR—CTPP检测系统，对 比常规 PCR—CTPP和改良的PCR-CTPP检测系统的可靠性。结果表明，改 良的PCR．CTPP检测系统更加准确，支持 了 常规方法存在理论缺陷的观点；批量鉴定结果进一步验证了改良方法的可靠性。该技术有望在医学和分子生物 学等领域广泛应用。 关键词：两对交叉5I物PCR；四 I物扩增受阻突变体系PCR；SNP分型；人为错配；亚甲基四氢叶酸还原酶 ImprovementonPCR—CTPP：aSNPgenotypingapproachbasedon mismatchtechnique WANG Ke一，ZHANG Jin．Tao。，4 YUN Y_u．Xia，2 7 7 WUXiao．Bing一，CHENA．Qun一， WANG Peng ．WANGKai—Juan ．ZHANG Jian—Ying 2DAILi．Ping 7 1．DepartmentofEpidemiologyandBiostatistics，CollegeofPublicHealth，ZhengzhouUniversity，Zhengzhou450001，China； 2．HenanKeyLaboratoryofTumorEpidemiology，Zhengzhou450052，China； 3．DepartmentofBioengineering，ZhengzhouUniversiyt，Zhengzhou450001，China； 4．LaboratoryAnimalCenterofZhengzhouUniversiyt，Zhengzhou450052，China Abstract：ToexplorethetechniqueprincipleofPCRwithconfrontingtwo-pairprimers(PCR—CTPP)andimprovehte accuracyofSNPgenotypingbytakingthe1298locusofhumangeneMTHFR asanexample，thereliabilitybetweencon— ventionalPCR-·CTPPandimprovedPCR--CTPPwascomparedusingreconstructedPCR--CTPPdetectingsystem intermsof designingappropriateprimersandoptimizingannealingtemperatureandthefinalconcentrationofprimers．Theimproved PCR—CTPPdetectionsystem provedtobemoreaccurate，whichsupposedtheviewpointonthetheoreticaldefectsofcon— ventionalPCR—CTPEThelarge—scalestudyverifiedthereliabilityoftheimprovedmethod．Itisexpectedthatthisimproved techn iquewouldbewidelyusedinthefieldofmedicinean