凡纳滨对虾TCP-1-eta基因的克隆及与耐寒性状的相关性.pdfVIP

逢 HEREDITAS(Beijing)2011年2,EJ，33(2)：168—174 ISSN0253-9772 WWW．chinagene．ca 研究报告 DoI：10．3724／SP．J．1005．2011．00168 凡纳滨对虾 TCP-1．eta基因的克隆及与耐寒性状的 相关性 殷勤 ，2彭金霞 1崔亮 ，谢达祥 ，王志伟 ，李奎2，陈晓汉 1．广西壮族 自治区水产研究所，南宁 530021； 2．中国农业科学院北京畜牧兽医研究所，北京 100193 摘要：为研究凡纳滨对虾耐寒性状的分子机理，文章克隆了凡纳滨对虾的耐寒相关基因 P一一eta并对其与耐 寒性状的关系进行了研究。首先，根据电子克隆所得序列设计5物『，采用 RT-PCR方法克隆得到长 1705bp的 P——eta基因序列，其中包括 1629bp的完整开放阅读框，编码542个氨基酸残基。然后，运用荧光定量 PCR 对 P一一eta基因进行时空表达谱的分析：(1)组织表达分析结果显示，该基因在凡纳滨对虾肌肉组织中表达量 最高；(2)不同低温处理下的表达结果显示，该基因在 15℃开始呈上调表达，13℃时表达量最高；(3)13℃低温处 理的表达结果显示，该基因在36h内呈小幅上调表达，但36h后表达量显著升高，48h表达量达到0h的 150 倍。进一步采用PCR—RFLP方法对 216只凡纳滨对虾 1尸一一eta基因进行了SNP多态性检测，并将其与耐寒性 状进行了关联分析。在该基因编码区第 731碱基上发现C／T突变，方差分析结果表 明该位点的不同基因型与耐 寒力指标 CDH(Cooling—degreehours)值相关(P0．05)，其中CC基 因型的耐寒能力 比玎 基因型强。 关键词：凡纳滨对虾；TCP——eta；SNP；耐寒性状 M olecular cloning ofLitopenaeus vannamei TCP-l-eta gene and analysisonitsrelationshipwithcoldtolerance YIN Qin一，PENG Jin．Xia，CUILiang，XIEDa—Xiang，WANG Zhi．Wei，LIKui， CHEN Xiao—Han 1．GuangxiFisheryInstitute，Nanning530021，China； 2．InstituteofAnimalSciences ，ChineseAcademyofAgriculturalSciences，Bejiing100193，China Abstract：Tostudythemolecularmechanism ofcoldtolerance，weclonedTCP——etahomologgenefrom Litopenaeus vannameiandsutdieditsrelationshipwithcoldtolerance．Basedonthesequencefrom electroniccloning，apairofprimers weredesigned，anda1705bpcDNAwasobtainedbyRT-PCR．TheeDNA contains1629bpORF,whichencodesapep— tideof542aa．TissueexpressionpaRernbyreal—timePCR analysisrevealedthatTCP-1一etamRNA mainlyexistedinmUS— cletissue．ColdinductionbydifferenttemperaturesrevealedthatTCP—l—etamRNA expression startedtoincreaseafter 收稿 日期：20l0—06—17：修回 日期：2010-07—15 基金项 目：国家科技支撑计划项 目(编号：2008BADB9B03，2007BAD29B01—6)，国家虾产业技术体系岗位科学家经费(编号 ：nycytx-46)，广西 壮族 自治区直属公益性科研院所基本科研业务费(编号：2060302GXIF．2008—02，2060302GXIF．2010-O4) 作者简介：殷勤，硕士，专业方向：动物遗传育种。E—mail：hnyinqin@yahoo．corn．cn 彭金霞，博士，研究方向：水产动物遗传育种与分子辅助育种 。E—mail：pengjinxia@gmail．com 殷勤、彭金霞同为第一作