腺病毒介导hGM-CSF基因转染人纤维肉瘤细胞后MHC表达的变化.pdfVIP

lll2 · 现代预防医学201lf= 38卷 6期 M~ydernPreventiveMedicine 2011．Vo1．38，NO．6 ， 1．2．4 流式细胞仪检测转崇hGM—CSF基 因荦口射线照射后肿瘤 弁上消液 ； 细袍表面MttCl、 Ⅱ娄分子的表达 情况 将转染成功的肿瘤细 (3)JJIl入 FITC联接 的抗 HLA—DR、抗 HLA—ABC单抗 cnlvu 胞J_H【50GyCo60射线照射灭活制成疫苗。 20 l放于4℃暗处 30min； FITC联接 的抗 HLA—DR、抗 HLA—ABC单抗用于检测野 (4)加入 2mlPBS缓冲液 1500r／min离心 5min，弃上 生 型 HT一1080细胞 、辐 照后 的 HT一1080细 胞 、HT一1080一 清液 ； hGM—CSF转染细胞 、辐照后 的HT一1080一hGM—CSF转染细胞 (5)加入 固定液 0．6ml放于4℃暗处 30min 共 四组细胞的MHCl、Ⅱ类分子表达情况。 (6)上机检测平均荧光强度和阳性细胞百分率 。 具体操作如下 ： 以上每组样品准备两管分别测两次 ，取平均值。 (1)取计数为 l×106待检测细胞加人 2nflPBS缓冲液中 1500r／min离心 5min，弃上清液： 2 结果 (2)再加入 2mlPBS缓冲液中 1500r／min离心5min， cn口3 8：S$vj S 8：SSvjIFsl c罩口u 注 ：横坐标为MHCI类分子 ，纵坐标为 MHCII类分子。从左至右分别为：野生型 HT一1080细胞；射线照射 HT一1080细胞 ；转染hGM-CSF基因 HT-1080细胞 ：照射转染HT-1080细胞 图 1 流式细胞仪检测TH一1080细胞表面 MHCI、 Ⅱ类分子阳性细胞百分率 6：SSv ‘F8 6：SSv-~t：S 8：SSv蓦FS E八 l， { 注：从左至右分别为：野生型HT一1080细胞 ；射线照射后野生型HT一1080细胞 ；转染 hGM—CSF基因后 HT一1080细胞 ；照射+转染 hGM-CSF基 因HT一1080细胞 图 2 流式细胞仪检测 TH一1080细胞表面 MHCI类分子表达荧光强度 8：SS、，F‘S 8：SSv羹Fs 注 ：从左至右分别为：野生型 HT一1080细胞 ；射线照射后野生型 HT一1080细胞；转 染hGM—CSF基因后 HT一1080细胞；照射后+转染hGM—CSF 基因后 HT一