禽流感DNA疫苗重组质粒组织分布的实时荧光定量PCR方法建立.pdfVIP

第33卷 第 3期 中 国 预 防 兽 医 学 报 VO1．33．No．3 2011年 3 月 ChineseJournalofPreventiveVeterinaryMedicine Mar． 2011 doi：10．3969~．issn．1008—0589．2011．03．09 禽流感DNA疫苗重组质粒组织分布的 实时荧光定量PCR方法建立 熊 杰 ，彭广能 ，王国俊 ，李俊平 ，姜永萍 ，陈化兰 z (1．四川农业大学动物医学院，I~1)Jl雅安 625014；2．中国农业科学院哈尔滨兽医研究所 农业部动物流感重点开放实验室 ／ 兽医生物技术国家重点实验室 ，黑龙江 哈尔滨 150001) 摘 要 ：为研 究禽流感病毒 A【IV)DNA疫苗重组质粒在组织中的分布情 况，本研 究以AIVDNA疫苗 pCAGGoptiHA5HA基NI为检测对象，分别建立检测AIVDNA疫苗重组质粒的SYBRGreenI实时定量 PCR方法 和 TaqManMGB实时定量 PCR方法。经优化 比较两种方法的特异性、敏感性、重复性和污染率。结果表明，两 种方法的标准 曲线线性关系均较好 ，相关系数均达到 0．999；最低检测量为 42copies，特异性强 ；探针法的重复 性优于染料法 ，污染率低于染料法，因此采用 TaqManMGB实时定量PCR方法检测 AIVDNA疫苗重组质粒组织 分布情况。 关键词 ：禽流感；DNA疫苗；组织分布 ；实时荧光定量 PCR 中图分类号 ：$852．65 文献标识码 ：A 文章编号 ：1008—0589(2011103．020305 Developmentofreal—timefluorescentquantitativePCRfor detectionbiOdiStributiOnofavianinfluenzaDNA vaccine XIONGJie，PENGGuang—neng，WANGGuo-jun，LIJun—ping2，JIANGYong—ping，CHENHua—lan (1．CollegeofVeterinaryMedicine，SichuanAgriculturalUniversity，Ya’an625014，China；2．AnimalInfluenzaLaboratoryof theM inistry Agriculturaland StateKeyLaboratoryofVeterinary Biotechnology，HarbinVeterinary Research Institute ， ChineseAcademyofAgriculutralSciences，Harbin150001，China) Abstract：To detectthe DNA vaccine ofpCAGGoptiHA5 in immunized chicks ， weestablished theSYBR Green I quantitativereal—timePCR (QPCR)andTaqManMGBQPCR methodswiththeprimersandTaqManMGBprobesdesigned accordingtothesequenceofpCAGGoptiHA5．Aftercomparedspecificity，sensibility，reproducibilityandcontamination， wefound thatthecorrelationwasabove0