禽流感病毒H5亚型HA1基因的原核表达及纯化.pdfVIP

2Ol1年 2月 甘 肃 农 业 大 学 学 报 第 46卷 第 l期 10～13 JOURNAIOFGANSU AGRICUITURAIUNIVERSITY 双 月 刊 禽流感病毒 H5亚型 HA1基因的原核表达及纯化 乔宏兴 ，方先珍 (1．郑卅I牧业工程高等专科学校 ，河南 郑』’II 450002；2．河南省畜牧局动物疾病控制中心，河南 郑州 450011) 摘要 ：根据 已报道 的禽流感病毒 H5亚型 HA1基 因设计 l对 引物 ，利用 RT—PCR技术扩增 目的基因片段 ，将 扩增片段插入到 pPROEXHTb表达载体上 ，并对重组表达质粒进行 PCR酶切鉴定，通过序列测定验证读码框 ，并 在大肠埃希氏菌 BI21(DE3)中进行表达．结果表 明：扩增 出的 1000bp的基凶片段在大肠埃希氏菌 中成功表达 ， 蛋 白产物约为 38ku，经 Westernblotting分析表明该融合蛋 白具有很好 的免疫原性． 关键词 ：禽流感病毒 ；HA1基 因；原核表达 中图分类号：Q 78 文献标识码 ：A 文章编号 ：1003—4315(2011)010010—04 ExpressionandppuurrlifIi1ccaatti1oonnoofiHA1geneH5SsUubbttVyDpee from avian influenzavirus QIAO Hong—xing ，FANG Xian—zhen (1．ZhengzhouCollegeofAnimalHusbandryEngneering，Zhengzhou,150011，China；2 Centreof ． AnimalDiseaseControl，HenanHusbandryBueara，Zhengzhou45001l，China) Abstract：According topublished HA1 gene H5 subtypesequenceofavian influenzavirus (AIV)in Genbank，apairofprimersweredesignedandsynthesized．Usingtheprimers，ageneofapproximately1 000bpinlength wasamplifiedbyRT—PCR ，then itwasinsertedintotheplasmidvectorpPROEX—HTb， therecombinantplasmidwasidentifiedbyPCR andexpressedinEscherichiacoli．Theresultsshowedthat anexpectedfusionproteinof38kuinsizewassuccessfullyexpressedwhichhadrightimmunitybywest— ernblotting． Keywords：avianinfluenzavirus；HA gene；prokaryoticexpression 禽流感 (avianinfluenza，AI)是 由正黏病毒科 A RNA节段组成 ，编码 10个基因 ．其中节段 4是血 型流感病毒 (influenzavirustypeA)引起 的一类全 凝素基 因(HA)，编码 的血凝素蛋 白是典型的 I型糖 世界范 围内的禽类 疫病u ，被 十H=界动 物卫生 组织 蛋 白，是诱导机体产生中和抗体的主要免疫原．近年 (OIE)规定为A 类烈性传染病 ，列入 国际生物武器 来 ，随着我