LEU2基因敲除对工业啤酒酵母高级醇生成量的影响.pdfVIP

研究报告 中 国 酿 造 2011年第3期 总第228期 ·27 · LEU2基因敲除对工业啤酒酵母高级醇生成量的影响 佐一含 ，朱旭东 ，陈叶福 ，吕鸿雁1，肖冬光 (1．工业微生物教育部重点实验室，天津市工业微生物重点实验室，天津科技大学 生物工程学院，天津 300457； 2．南开大学 生命科学学院，天津 300071) 摘 要 ：通过敲除啤酒酵母中D一丙基苹果酸脱氢酶基因(LEU2)，研究该基 因对工业啤酒酵母高级醇特别是异戊醇生成量的影响。通 过醋酸锂一步转化法 ，将一段两端具有LEU2基因序列同源 区，中间为遗传霉素 (G418)抗性基因的DNA片段转入酵母细胞 中，与 LEU2基因的ORF(openreadingflames)进行同源重组 ，利用遗传霉素抗性进行筛选。将突变株与出发菌株进行发酵实验，测定其发酵 性能和高级醇的生成量。筛选获得了LEU2基因突变的工、啤酒酵母。在支链氨基酸含量较低的培养基中进行发酵测定，突变株发酵 液中高级醇含量比出发菌株降低了9．97％，其 中异戊醇的含量降低了11．82％，而酒精度、发酵速度等发酵性能没有明显变化。LEU2基 因敲除可降低工业啤酒酵母在支链氨基酸含量较低的培养基中高级醇特别是异戊醇的生成量。 关 键 词 ：LEU2基因；高级醇；酿酒酵母 ；基因敲除 中图分类号 ：TS261一 文献标识码：A 文章编号：0254—5071(2011)03—0027—04 EffectOfLEU2geneknockoutonhigheralcoholsproductioninnidustrialSaccharomycescerevisiae． ZUO Yihan ，ZHU Xudong。，CHEN Yefu’，LUHongyan ，XIAODongguang (1．KeyLaboratoryofnIdustrialMicrobiology,MinistryofEducation，TianjinIndustrialMicrobiologyKeyLaboratory, CollegeofBiotechnology,TianjinUniversityofScienceandTechnology,Tianjin300457,China； 2．DepartmentofMicrobiology,CollegeofLifeSciences，NankaiUniversity,Tianjin300071，China) Abstract：EffectofB—isopropylmalatedehydrogenasegene(LEU2)onproductionofhigheralcohols，especiallyisoamylalcohol，inindustrialbrewing yeastwasstudiedwiththemethodofgeneknockout．Therecombinantcasse~ePo3一KanMX—Po4wiht LEU2genehomologyregionatbothendsand wiht KanMX geneinthemiddlewasamplifiedbyPCR．TheobtainedPo3一KanM X-Po4 fragmentwas~ansformed intoSaccharomycescerevisiae usinglihtiumaceattemehtod．ThemuatntwithLEU2knockedoutwasselectedoutbytheresistancetogeneticin (G418)andfurtherconfirmedby PCR．Fermentationperformanceandproduction ofhigheralcoholsb