AADC和NURR1基因联合c172神经干细胞移植治疗帕金森病的实验研究.pdfVIP

·论 著· 移植治疗帕金森病的实验研究☆ 刘军+ 李庆军6 周道友“ 肖颂华+ 杨淞然+ 杨炼红4 邢诒刚“ 【摘要】 神经干细胞(D组)。观察其病理性旋转行为的改善，采用酪氨酸羟化酶(TH)的免疫组化方法研究脑内多巴胺含量的变化，并用荧光 增多，TH染色的神经元树突或轴突密集，体内TH阳性区域明显较PD模型组扩大，其中尤以D组病理学改善最为明显。荧光示踪观 移植后改善了动物的旋转行为，增加了脑内多巴胺的表达，且植入的神经于细胞可同宿主神经元形成突触联接，为研究多基因联合神 经干细胞移植治疗帕金森病提供了新方法。 【关键词】 芳香族氨基酸脱羧酶基因 NuRRl基因c17．2神经干细胞帕金森病基因治疗 【中图分类号】Q781 【文献标识码】A 帕金森病(Parkinsondisease，PD)是一种严重危害中老年健移植联合基因治疗帕金森病的可行性，为多基因联合胚胎神经干 康的中枢神经系统退行性疾病，其病理改变主要是中脑多巴胺能 细胞移植治疗帕金森病提供新方法和新的理论基础。 神经元丢失和残存的多巴胺能神经元变性，多巴胺(dopamine， 1材料与方法 DA)产生减少而发病。因此设法补充脑内DA能神经递质，补充 丢失和保护残存的多巴胺能神经元，与其支配的脑区内相应的神 1．1 材料人神经元性AADc基因的克隆与体外表达的研究已 经元建立有效的突触联系，恢复原来的有效的多巴胺能神经支 另文发表”1，NuRRl基因的真核表达载体的构建参见文献3，4。 配，是治疗PD的最佳途径。 我们在既往的研究中已证明芳香族氨基酸脱羧酶(AADc) 基因为L—dopa转变为DA过程中的限速酶，补充外源性的 AADc以保持AADc酶活性于稳态水平，对于改善PD患者的症 g，由中山 状，延缓和减低患者的”症状波动”，具有积极的意义¨o。 大学实验动物中心提供。 本研究在上述基础上，采用具有多分化潜能的c17．2神经干 细胞作为靶细胞，并结合可促进神经干细胞向多巴胺能神经元方 经干细胞培养、传代及免疫组化检测详见参考文献5。 向分化的NuRRl基因’2o，促使神经干细胞表达多巴胺能神经元 1．3 阳性标记，在补充已减少和变性的多巴胺能神经元的基础上，以 达到进一步补充并改善PD患者体内酶的活性不足，纠正PD患 者的病理和生化异常，改善其临床症状，来探索胚胎神经干细胞 染主要步骤按照试剂说明书进行。使用G418筛选出经质粒转染 的神经干细胞。 1．4 PD模型的制作及分组sD大鼠用10％水合氯醛腹腔内 6广东省卫生厅基金资助项目(编号：B2004045)广东省自然博 麻醉后。行6一羟多巴胺单侧纹状体两点定位注射法制作PD模 士启动基金资助项目(编号 。 型，该方法的具体操作及有效性详见参考文献6。 通信作者(Email：xingyig锄g@hotmail．com) + 中山大学孙逸仙纪念医院神经科(广州510120) 6 中山大学孙逸仙纪念医院神经科博士研究生现在广东省东莞 内麻醉。行同侧纹状体一点定位注射(坐标：前囟嘴侧1．0mm、 市人民医院神经科 正中线左侧2．5mm、大脑表面腹侧4．5mm)，随机分为4组，每组 “ 中山大学孙逸仙纪念医院神经科硕士研究生现在广东省中医 院神经一科 461 AADc转染后的c17．2神经干细胞PBsA悬浮液，c组脑内注射