ABCE1基因对小细胞肺癌增殖侵袭迁移能力的影响.pdfVIP

黄选笠垒旦!垦!墨国!型!塑堕堕垂埴堕，握袭!适整篮应鲤墅堕筮!塑 ·119· ABCEl基因对小细胞肺癌增殖、侵袭、迁移能力的影响 黄 波 王晓东 郎贤平 (辽宁医学院附属第一医院胸外科，辽宁 锦州 121000) [摘要] h后应用west． siRNA-2后的小细胞肺癌细胞迁移速度明显慢于转染ABcEl-SiRNA-N的细胞和对照组细胞。结论 成功构建了ABcEl基因siRNA表达载体 明显的抑制细胞生长，使其增殖能力下降，降低其侵袭、迁移能力。 [关键词]小细胞肺癌；ABcEl；siRNA [中图分类号]R736[文献标识码]A[文章编号] 小细胞肺癌约占全部肺癌的20％一25％，其恶性程度高， 大连宝生物公司。引物设计、合成以及测序由大连宝生物公司 发展迅速，早期可有远处广泛的转移，确诊时70％～90％病人 已有临床或亚临床的淋巴或血行转移，自然病程短。小细胞肺 ABCEl-SiRNA—N为无意义干扰序列。 癌对放、化疗敏感，近期疗效好，缓解率可达65％～90％，但 1．2 siRNA载体构建 90％以上患者治疗后出现复发和转移，而肿瘤的转移和侵袭是 退火并将退火产物与RNAi—Ready 治疗失败患者死亡的主要原因…，因此寻找新的途径治疗小细 胞肺癌尤显重要。由于目前发现的与小细胞肺癌发生、发展密 切相关的基因较为罕见，寻找新的小细胞肺癌差异表达基因， 从转化平板上挑取阳性单菌落，进行扩增，检测阳性克隆， 并确定其在小细胞肺癌中的作用，对于小细胞肺癌的诊断、预 并测序。 防和治疗均具有重要意义。ABCEl基因属ATP结合盒转运子 1．3 细胞转染转染前ld，NCI—H“6细胞用胰酶消化，接种 基因亚家族，其蛋白位于细胞质，分布于人体多处组织，能够阻 断干扰素介导的2-5A／核糖核酸酶L细胞抗病毒通路，抑制细 达到60％～70％融合时，准备转染。转染当天更换为无胎牛血 胞凋亡过程，并可能在促进蛋白质合成及细胞增殖分化方面发 清的RPMI—1640培养基，每个培养孔1 挥作用¨。。为进一步观察ABcEl基因对小细胞肺癌细胞株的 侵袭及迁移能力的影响，笔者在构建ABCEl基因SiRNA表达 h 载体DNA，混匀后室温孵育30min，加入到6孔板中培养，6 载体的基础上，将上述载体转染小细胞肺癌细胞株，观察 后加入100斗l胎牛血清。转染48h后，荧光显微镜下观察转 ABcEl基因对小细胞肺癌增殖、侵袭、迁移能力的影响。 染情况。转染成功后检测各项指标。 1．4 westem印迹鉴定沉默效果收取部分细胞，加入预冷裂 l材料与方法 解缓冲液，剪碎，超声匀浆，低温超速离心。吸取上清液，LowTy 1．1 材料人小细胞肺癌细胞株NCI-H446由中国科学院细 法测定蛋白浓度，SDS．PAGE凝胶90V电泳3h后转印。洗膜 胞库引进。新生小牛血清购于杭州四季青公司，RPMI1640培 后1％BsA封闭非特异性抗原2h。缓