音乐电针对抑郁模型大鼠大鼠行为学和血清TGF-β1的影响.pdfVIP

将实验动物置于7:00-9:00光照、19：00-7：00黑暗的实验室中，驯养1周后，按体重随 机分为正常组，在同样的环境中饲养；模型组、音乐电针组、百忧解组，每组10只。 1.4慢性应激抑郁大鼠模型的制备 4 1 从第八天起，正常组每笼饲养 只，其余组每笼饲养 只。除正常组外，其他各组动物开 21 1.0mA, 1 1 始接受 天各种不同的应激，包括电击足底（电流强度 每隔 分钟刺激 次，每次持 10s 30 4 5 1 /s 15 1 续 ，共 次）、冰水游泳（ ℃， 分钟）、摇晃（ 次 ， 分钟）、夹尾（ 分钟）、禁水 24 48 2 （ 小时）、禁食（ 小时）和昼夜颠倒等，每天随机安排一种，平均每种刺激使用 次。 1.5治疗： [1] 在造模的同时开始治疗。音乐电针组：参照李忠仁 主编的《实验针灸学》（中国中医药出 版社，2003年1月）取“百会”、左侧“三阴交”穴，以30号1寸毫针进行针刺，“百会”平 刺0.3-0.5寸，“三阴交”直刺0.5-0.8寸。针柄接音乐电针治疗仪，选角调音乐（广东民乐“步 步高”），刺激强度以局部皮肤肌肉轻微颤动为宜，每日1次，每次20分钟，连续21天。百忧 解组：给予百忧解（50mg/Kg/d）灌胃治疗，每日1次，连续21天。模型组除造模外不给予任 何治疗令其自然恢复，正常组既不造模也不给予任何治疗。 1.6 检测指标和方法 1.6.1 观察各组大鼠的精神、进食、体重等一般状态。每只动物于造模第1天及第21天分别 称体重。 1.6.2旷场实验(Open—fieldtes)：木制箱100cm×l00cm×50cm，周壁、底面用笔划分成面 积相等的25块方格，沿墙格称外周格，其余为中央格。将动物放在正中央格，观察3min内活 动情况。以动物穿越底面块数为水平活动(crossing)得分，以直立次数为垂直活动(rearing) 得分。在实验开始第1天和第21天分别进行测定。每只动物仅进行1次，每次时间为3分钟。 1.6.3 鼠尾悬挂实验 将大鼠尾端1 cm的部位贴在一水平木板上(木板距离地面约1 m)，使 动物呈现倒挂状。悬挂两侧用木板隔开动物视线，动物为克服不正常的体位而挣扎活动，但活 动一定时间后，出现间断性“不动”显示“失望”状态。计算6min内大鼠不动的时间(motionless time，MT)，并观察大鼠挣扎幅度。 1.7取材： 实验结束后，电子天平称量大鼠体重并记录，标记试管。乙醚麻醉大鼠后，迅速断头取血， 每只约2ml左右，以每分钟3000转速离心10分钟，吸取上清，置于-30℃待测。 1.8试剂与仪器 主要仪器及试剂：GG系列电子天平，型号：JJ1000/d=0.02g；Sarlorius 电子天平，型号： BL150/d=0.01g；PE-1420多功能微孔板分析仪，TGF-β1酶联免疫吸附试验试剂盒(购自广州中 山生物试剂公司)。 1.9指标检测 大鼠血清TGF-β1，采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测。实验步骤：①按1：20浓度稀释待测 血清；②在免疫板的微孔中分别加入 100μl抗TGF-β1-HRP；③再加入100μl标准品、样品 稀释液、质控参数液；④盖板后室温下孵育1.5h；⑤用缓冲液洗板6遍；⑥加底物(四甲基联 苯胺)100μl盖板后，室温下再孵化30min；⑦加100μl终止液；⑧在酶标仪测定波长450nm 时的A值，620nm作为校正值；⑨制作标准曲线；⑩根据标准曲线分别将每一测试样本的A值 换算出TGF-β1的含量(pg/ml)。 1.10统计学处理 所得数据均以 ±s表示，采用SPSS11.0统计软件分析数据，采用单因素方差分析：方差齐 x 时采用LSD法（最小显著差异法）；方差不齐时采用DunnettT3法。方差分析齐性检验水平α1 ＝0.05,显著性检验水平α＝0.05。2 2.结果 2.1造模后第1天，各组大鼠体重无明