手足口病死亡病例的临床与病理特征及EV71宁波分离株全基因组序列分析.pdfVIP

日本TaKaRa公司，严格按照说明书操作)，扩增 治疗(具体用药不详)，未在医院留观。予2010 引物及片段长度见表l。反应条件为94℃4min， 年5月10日下午4时30分患儿突然无心跳、呼 随后94℃45 oC2rain，共 吸，．急送上级医院，但患儿已经死亡。 sec，58℃45see，72 ’’ 1．2尸体解剖及组织病理学 计34个循环；72℃19min。 ‘ 患儿均于第2天下午依法在宁波天一职业技术 3’末端快速扩增(3’RACE)及5’末端快 学院尸检室进行尸体解剖，尸检标本经中性甲醛固 3’．Fun 定，石蜡包埋，4恤m厚切片，HE染色，进行常规and RACE试剂盒，严格按照说明书操作， 组织病理学观察。并取患儿肠内容物及肠道组织送 扩增引物及片段长度见表l。反应条件为94℃3 sec，55℃45 1 min， 宁波市疾病预防控制中心(CDC)进行病毒检测，min，随后94℃45 see，720C 经reM—timePCR检测均为EV71感染。 共计25个循环，72℃10rain。PCR产物1％琼脂 1．3 EV71的提取与扩增 糖凝胶上样孔，另设空白对照和DNAMarker，直 患儿肠道内容物经超声破碎离心后，应用 流80V电泳45min，紫外检测仪下观察结果并用凝 胶成像系统保存。 Qiagen试剂盒(美国)提取病毒RNA，随后进行 逆转录扩增得到cDNA(一步法RT·PCR试剂盒， 表1 PCR引物、位置及目的片段 1．4分子克隆、测序及同源性比较 量出血点。心脏外观正常，心包腔内少量淡黄色液 PCR产物的纯化DNA回收后，制备感受态细胞，体渗出。腹腔内无渗出液，肠系膜充血，部分空肠。 及回肠坏死呈灰褐色，肠系膜淋巴结肿大；腹腔其 将PCR产物连接入pMDl8-T载体，按照载体说明书 进行操作，挑选克隆经过酶切鉴定后，终止法测定插 余器官未见明显异常。颅腔内无出血，颅内少量淡 入片段的核苷酸序列。采用DNAMAN软件和Blast红色液体，脑膜充血，脑水肿显著。 gov／)对系列进2．2镜下所见 software(http：／／blast．ncbi．nlm．mh 行拼接和比对。 2．2．1 心脏2例患儿心肌纤维细胞结构正常， 心肌间质充血，心肌细胞水肿，心外膜少量炎性细 2 结果 胞浸润。心脏结构正常(图1)。 ． 2．1大体解剖所见 2．2．2肺2例患儿两肺显著充血：肺泡壁毛细 2例患儿均发育营养良好。手部有小泡疹，口 血管和肺小静脉高度扩张淤血。肺泡腔内充满水肿 腔粘膜小溃疡，角膜混浊。额部、下颌、上颈、肩 液，部分区域肺出血，使肺组织显著实变，肺问质 胛、上胸部及会阴、臀部均可见粉红色丘疹，上唇 及小血管周围见少量炎细胞浸润，以淋巴细胞为主 及下唇均见口腔溃疡。体表淋巴结