IGFBP5基因在草原红牛阉割牛与公牛不同组织中的表达差异.pdfVIP

第一部分遗传育种及产业发展趋势 自从1957年以来，发现一条以IGFs为中心的调节轴，这条轴和其他轴一样也具有重要的生理功能，在分 子水平调节着细胞的生长、分化和凋亡，也影响着组织的分化、生长和肿瘤的发生【2】。这条轴包括2 Ijl和他们在细胞膜表面的受体—IGF．IR、IGF．IIR，6个溶解性的胰 条肽类生长因子一I(币．I、IGF．II 岛素样生长因子结合蛋白以及能分解这些蛋白的酶类【4】。IGFBP5作为IGF轴的重要成员，具有储存 在骨内、乳腺内、前列腺内及其他组织细胞内都发挥着重要的调节功能，有待人们进一步研究。 固定和自群繁育提高等三个阶段培育而成的肉乳兼用型新品种。草原红牛目前主要集中在东北地区养 殖，但其抗热性也比较强，在长江以南也能适宜，具有适应性强，耐粗饲，繁殖率高，抗病力强等特性， 能够对大多数粗饲料进行采食。因此无论是饲养乳用还是肉用的草原红牛都有很大的发展前景。 本实验采用实时荧光定量PCR技术检测IGFBP5基因在草原红牛阉割牛和公牛背最长肌组织中 的表达情况，比较其在草原红牛群体中的阉割牛与公牛背最长肌组织中的表达差异。以期找到由于阉 割而引起的IGFBP5调控机理的变化规律，从分子水平为研究该基因的表达调控打下基础，也为今后 肉牛的遗传改良提供新的选择依据。 1材料与方法 1．1试验动物与样品采集 家标准统一饲养，育肥结束后进行屠宰。屠宰后取心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、十二指肠、瘤胃、 背最长肌组织迅速液氮保存，--80℃储存备用。 1．2主要试剂及仪器 TRlzol 2102 PC型紫外分光光度计，尤尼克公司。 量PCR仪，AppliedBiosystems公司；UV 1．3荧光定量PCR 1．3．1 eDNA的获得 u 浓度，使反转录体系中总RNA量一致，均为2．0 g，确保定量精确性。 1．3．2引物设计 应用Primer 5设计引物，由上海生工生物技术有限公司合成。引物退火温度均设计在60 premier ℃． IGFBP5基 因 ( 105327) ： NM_001 R：ACATACTCAGCACCAGCATCAC。 1．3．3实时荧光定量PCR Green 采用SYBR mix，12．5lal；Forward／ReversePrimer(10u p IIl；cDNA u l；Rox，0．5 l： l／pm01)，0．5 Template，1．0 1．t Volume25．0I．L l；ddH20，9．85l；T0tal l。反应条件为：95℃5min；95℃10s， Taqpolymerase，0．15|l ·153· ‘中国畜牧兽医学会养牛学分会2011年学术研讨会》论文集 60℃30s，72C 30s，40个循环。每次反应设置标准品、未知样品(各重复3次)和一个阴性对照(N1陀)。 1．2．5数据统计与处理方法 以公牛各组织表达量为标准，采用2-a△Q方法计算相对表达量。以GAPDH为内参基因进行标准 化。试验数据均以平均值±标准差表示，应用SPSSl2．0软件进行统计分析，差异显著用最小显著极 差法(LsD)和独立样本T检验分析。 2结果与分析 2．1扩增片段的鉴定 将该基因与内参基因扩增的片段测序结果与引物设计源序列进行同源性比对，同源性为100％， 说明该引物扩增得到的RT．PCR产物为目的基因。 2．2阉割牛与公牛不同组织中IGFBP5基因的表达差异 表1