抗TGFβ1核酶以及嵌合型核酶的细胞外和肝星状细胞内活性鉴定.pdfVIP

中国科学 C 辑 生命科学 2005, 35 (4): 365~372 365 抗TGFb1 核酶以及嵌合型核酶的细胞外 和肝星状细胞内活性鉴定* † † 宋宇虎 刘 芳 田德安 薛秀兰 刘南植 吴小力 林菊生 ** 金由辛 ** ( 华中科技大学同济医学院附属同济医院肝病研究所, 武汉 430030; 华中科技大学同济医学院附属协和医院血液病 研究所, 武汉 430022; 中国科学院上海生命科学院生物化学与细胞生物学研究所 分子生物学国家重点实验室, 上海 200031) 摘要 大量研究表明转化生长因子1 参与细胞的多种生理和病理过程. 为了研究TGF1 在这 些过程中的详细发病机制, 设计了针对TGF1 的非嵌合型锤头状核酶和U1 小核RNA 嵌合型核 酶. 鉴定非嵌合型锤头状核酶和U1 小核RNA 嵌合型核酶的胞外以及活化型肝星状细胞内的活 性. 核酶的胞外切割反应结果证实, 非嵌合型核酶的胞外活性优于U1 小核RNA 嵌合型核酶. 进 一步研究发现, U1 小核RNA 嵌合型核酶在转染的肝星状细胞内可以高效下调TGF1 的表达, 且 其胞内活性明显强于非嵌合型核酶. 这些结果表明, 抗TGF1 的U1 小核RNA 嵌合型核酶不仅 为 TGF1 在细胞的生理和病理过程中具体作用机制的研究提供一种有效的工具, 而且有望为 TGF1 相关性疾病的治疗提供一个有效手段. 关键词 核酶 U1 小核RNA 转化生长因子b 1 肝星状细胞 转化生长因子(transforming growth factor , 愈合 造血 免疫和炎症反应等. 阐明 TGF 1 在这 TGF)是一簇结构密切相关 参与多种生理和病理功 些生理和病理过程中的具体作用机制非常重要. 众 能的细胞因子, 其中TGF1 研究最多, 也最深入. 目 多研究证实TGF 1 通过TGF/Smad 信号途径发挥生 前大量研究证实, 转化生长因子 1 参与许多生理和 物学效应, 然而有些试验表明 TGF 1 也可以不通过 [1~4] 病理过程, 如纤维化的发病 肿瘤的抑制和进展 胚 Smad 信号途径来发挥作用 , 这些发现表明, 胎的发育 细胞外基质的形成 骨骼的发育 创伤的 TGF 1 在这些生理和病理过程中的作用机制复杂, 2005-0 1-26 收稿, 2005-05-28 收修改稿 * 中国科学院重大项目(批准号: KSCX2-2-204)和湖北省自然科学基金项目(批准号: 2004ABA204)资助 ** 联系人, E-mail: jslin@, yxjin@ † 同等贡献 SCIENCE IN CHINA Ser. C Life Sciences 366 中国科学 C 辑 生命科学 第35 卷 且至今尚未完全阐明, 因此需尽快阐明 TGF 1 的具 胶电泳回收 PCR 产物, 并把其克隆入pGEM-T 载体 体作用机制. 这可以通过抑制TGF 1 的表达来实现. (Promega, Madison, WI) 内, 构建新的质粒 pTGF 1,