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抗克伦特罗单链抗体表达载体的构建与鉴定.pdf
生 物 工 程 学 报 Chin J Biotech 2008, August 25; 24(8): 1470-1474
Chinese Journal of Biotechnology ISSN 1000-3061
cjb@ © 2008 Institute of Microbiology, CAS CSM, All rights reserved
研究简报
抗克伦特罗单链抗体表达载体的构建与鉴定
1 1 1 1 2 1 1 1
王弘 , 梁艳 , 杨金易 , 刘细霞 , 张宏斌 , 雷红涛 , 沈玉栋 , 孙远明
1 广东省高等学校食品质量安全重点实验室/华南农业大学食品质量安全研究所, 广州 510640
2 广州军区广州总医院医学实验中心, 广州 510010
摘 要: 为构建克伦特罗(Clenbuterol, CBL)单链抗体(scFv)表达载体, 实现其在大肠杆菌中的表达。以 pCANTAB5E-
CBL 质粒为模板, 扩增 CBL 的scFv 基因, 与pPICZαA 载体重组, 然后以重组质粒pPICZαA-scFv 为模板扩增scFv 及
其相连的6 个组氨酸(6×His) 片段, 再与载体pBV220 连接, 转化大肠杆菌DH5α, 阳性克隆质粒经酶切和PCR 鉴定后进
行目的片断的序列测定。重组菌经温度诱导表达重组单链抗体, 并通过SDS和Western blotting 对其鉴定。采用
竞争ELISA 检测重组单链抗体的抗原结合活性。结果表明重组质粒pBV220-scFv 含有插入片段, 与原序列的同源性达
99.8% 。重组蛋白的分子量接近37 kD, 能够被抗His 标签单克隆抗体特异性识别且可被游离的 CBL 竞争性抑制, IC50
值为 4.55 ng/mL 。这说明我们成功构建了重组质粒pBV220-scFv 并实现了其在大肠杆菌中的表达, 为进一步进行CBL
免疫法快速检测奠定了一定的基础。
关键词: 克伦特罗, 重组单链抗体, 原核表达
Construction and Expression of Anti-clenbuterol Single Chain
Fv Recombinant Vector
1 1 1 1 2 1 1
Hong Wang , Yan Liang , Jingyi Yang , Xixia Liu , Hongbin Zhang , Hongtao Lei , Yudong Shen ,
and Yuanming Sun1
1 The Higher Education Key Laboratory of Food Quality and Safety of Guangdong Province /Research Institute of Food Quality and Safety of SCAU,
S
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