抗人p185erbB2人鼠嵌合抗体真核表达载体的构建表达及活性测定.pdfVIP

维普资讯 北 京 大 学 学 报 ( 医 学 版 ) JOURNALOFPEKINGUNIVERSITY(HEALTHSCIENCES) Vo1．36 No．5 Oct．2004 ·491· · 论 著 · 抗人p185盯2人一鼠嵌合抗体真核表达载体的 构建表达及活性测定 姜北海，刘文斌，孟 麟，吴 健，寿成超 、(北塞京奎市肿瘤防月治中研究所，’生一化…与分…子生一物…学实～验室一…，北京…100‘034) 【关键词]p185e~ ；单克隆抗体；嵌合抗体 [摘 要]目曲：HER2／neu过度表达见于多种恶性肿瘤。作为肿瘤抗原，p185 是一个理想的肿瘤治疗靶点。本 实验在既往工作基础上，构建嵌合型抗p185 单克隆抗体(单抗)的真核表达载体，并在 CHO—dhfr一细胞中表达， 从而降低鼠源性抗体的免疫原性，为进一步的应用研究奠定基础。方法：RT—PCR扩增p185 单抗 1—2的轻、重 链可变区基因，插入嵌合抗体真核表达载体pWSD2中，脂质体转染 CHO—dhfr一细胞。经 RT—PCR、间接 ELISA 、 Westernblot检测人一鼠嵌合抗体的表达水平，用ELISA、免疫沉淀方法对嵌合抗体的亲和力和特异性进行初步鉴 定。此外，采用MTY比色法检测嵌合抗体对高表达p185 的乳腺癌细胞系SKBR3的生长抑制作用。结景：用RT — PCR、间接ELISA、Westernblot方法证明人 一鼠嵌合抗体在 CHO．dhfr一细胞中表达；ELISA检测提示嵌合抗体与 高表达p185~ 的细胞反应阳性，与低表达p185 的细胞反应阴性；免疫沉淀结果表明嵌合抗体可与p185 分 子特异性结合 ；MTY比色法检测表明嵌合抗体对过表达p185 的乳腺癌细胞SKBR3的生长有抑制作用。结论： CHO—dhfr一细胞表达的人 一鼠嵌合抗体可与p185e~特异性结合，并可抑制高表达 p185~ 的肿瘤细胞生长，表 明 抗人p185~ 人一鼠嵌合抗体具有肿瘤生物治疗的潜在应用价值。 [中图分类号]Q813．2 [文献标识码]A [文章编号]1671—167x(2004)05-0491-05 Eukaryoticexpressionandbiologicalactivitiesofanti．p185。毗mouse／humanchimer- icantibody JIANGBei．hai，LIUWen—bin．MENGLin，WUJian，SH0UCheng—ehao (DepartmentofBiochemistryandMolecularBiology，PekingUniversitySchoolofOncology；BeijingInstituteforCancerRe· search；Bering 100034，China) KEYWoRDS p185 ：Monoclonalantibody；Chimericnatibody SUMMARY Objective：OverexpressionoftheHER2／neuoncogeBeiSafrequentmoleculareventin multiplehumancancers．Beingacancernatigen，pl85 isanidealtragetforimmunohterapy．Inorder todecreasehteimmunogenicityofmouseanti．pl85 monoclonalnatibodyinhumna cnacerhterapy．we constructedhteeukaryoticexpressionvectorofnati．p185 chimericmonoclonalnatibodynadverified expressionofthechimericantibodyinCHO．dhfr—cel1．M ethods：I11evariableregionsoflightch