化瘀通络中药对5%2f6肾切除大鼠肾组织MMP-9%2fTIMP-1表达的影响.pdfVIP

A 髦≯第21次中华中医药学会肾病分会学术会议论文汇编 用这种方式观察肾脏问质纤维化过程中肾小管上皮细胞转分化的改变，结果显示，ct-SMA的阳性面积及积分光密 度的表达在蛋白及基因水平上较假手术组均显著性增强，III型胶原的表达及纤维化面积与假手术组相比亦有显著性 差异。给以血管紧张素受体拮抗剂缬沙坦及中药红花治疗后，可显著抑制a-SMA的表达和III型胶原的分泌。缬沙 坦的主要作用是通过拮抗血管紧张素Ⅱ以及其下游因子TGF·pl来实现的，而红花的作用尚不完全明白，但我们前 期的实验证实与调控肾上腺髓质素的表达有关。 红花是常用的活血化瘀中药，药性辛，温，归心、肝经。主要功效为活血通经，祛瘀止痛，化滞消斑。红花含 有多种化学成分，如红花醌甙、新红花甙、红花甙、木脂素类、脂肪油、红花多糖、多种氨基酸等。具有改善心肌 缺血、降低冠脉阻力、增加冠脉流量和心肌营养性血流量、降低血脂、抗血小板聚集、提高小鼠的耐氧能力等作用。 应用于心脑血管疾病、妇科病等，在肾脏病的治疗中也有很好的临床效果，本研究显示红花可以抑制单侧输尿管结 扎大鼠肾脏a-SMA和ⅡI型胶原的表达，这可能是红花拮抗肾闻质纤维化以及治疗慢性肾脏疾病的机理之一，但具 体作用成分有待于今后进一步的研究。 陈志强1’2范焕芳2尹智炜1张若楠1张江华1 1河北医科大学2河北医科大学中医院 是调节细胞外基质(ECM)最重要的降解酶系之一。本实验采用5／6肾切除大鼠模型，采用免疫组织化学法观察残 余肾组织中MMP．9／TIMP-1蛋白表达的变化。同时用化瘀通络中药肾络通进行干预，探讨其部分相关的可能机制。 1材料与方法 1．1实验动物清洁级健康雄性SD大鼠(体重180a：2009)46只，由河北医科大学动物中心提供。 1．2实验用药(1)化瘀通络中药肾络通，由地龙、乌梢蛇、丹参、黄芪等组成。上药按比例称取后，水煎，过 滤，浓缩至每毫升含生药1．59。装入瓶中密封保存于4C冰箱中。饮片购置于河北医科大学中医院药房，并经过鉴 定均为正品。(2)苯那普利，由瑞士诺华制药有限公司提供，10rag／片。用前用蒸馏水配制O．3mg／ml。 1．3主要试剂：兔抗大鼠MMP．9、TIMP．1多克隆抗体，均为SantaCruz公司产品。SP、DAB试剂盒，由北京 中山生物公司提供。 1．3实验方法46只大鼠随机分为假手术组、模型组、肾络通组、苯那普利组。假手术组为10只，其它三组均 为12只。将大鼠麻醉，从背部左侧切开，暴露左侧肾脏，假手术组剥离肾包膜，不做肾脏切除。其他三组对左肾 0)，苯那普利组给予苯那普 行上、下极切除，一周后切除全部右肾，然后缝合。肾络通组给予肾络通煎剂(259／kg 利(6mg／kg·d)，均以灌胃的形式给药。假手术组和模型组灌予相应剂量的蒸馏水。各组动物每日灌胃一次，于实 验的第16周末结束。 1．4检测指标与方法 1．4．1常规和免疫组织化学染色：于实验第16周末，取各组大鼠肾组织，10％中性福尔马林固定，石蜡包埋， 制成39m的石蜡切片，行HE、PAS染色并行免疫组织化学法观测MMP．9、TIMP．1表达。 1．4．2免疫组织化学染色半定量分析：肾小球内表达的半定量分析：采用HPIAS．1000病理图象分析系统，分别 测量每个肾小球中MMP一9、TIMP．1的着色面积及整个肾小球面积，以上二者的比值表示以上各指标在肾小球中的 相对含量，并同时进行积分光密度(ILD)测定。每组取6只鼠的标本，每个标本分析10个以上完整的肾小球。肾 象分析系统，计算每个视野的面积以及阳性染色面积和染色强度(积分光密度ILD)，然后以整个视野面积比阳性 染色面积和染色强度。面积比值为相对含量，以ILD表示表达强度。4组大鼠每组选取6只大鼠标本进行半定量分 析。 for 1．5统计学处理：使用spssll．5windows统计软件进行分析，数据用均数士标准差(x士S)表示，采用单因 素方差分析方法对实验结果进行统计学分析。 2结果 2．1光镜观察结果 假手术组肾小球及小管间质结构基本正常。模型组肾小球系膜区呈局灶性或弥漫性中重度增宽，以系膜基质增 k三夕第21次中华中医药学会肾病分会学术会议论文汇编 多为主，部分