聚乙二醇修饰β-干扰素的初步的研究.pdfVIP

聚乙二醇修饰B．干扰素的初步研究 徐静倪道明 张振龙(北京生物制品研究所。北京100024) 【摘要】 目的采用平均分子量为5kDa的已活化的单甲氧基聚乙二醇(n唧)对基因工程重组人融干扰素 (rhlFN—p)进行化学修饰。方法优化修饰条件，选择对IllI刖．p反应性高的修饰剂，制备三种不同修饰程度的修饰 物，并对修饰物进行初步检定。结果三种修饰物的修饰率分别为10．12％、22．99％、42．47％；比活性分别保留为 原来的93．53％、48．69％、13 18％；多分子PEG修饰对ddFN—B的空间构象有“微扰”作用，而单分子PEG修饰对 活性及其他生物学特性有一定的影响。 【关■词】基因工程重组人p-干扰素聚乙=醇化学修饰 rhlFN．B是一种多功能细胞因子，它可以在细胞 透析液为含有0．1％SDS的0．1摩尔，升的四硼 表面与特殊的受体结合而发挥抗病毒、抗细胞增殖 酸钠溶液，pH值为9．2。透析后取样，Lowry法”1测 定rhlFN．8蛋白浓度。 和免疫调节作用。1993年，rhlFN．8获美国FDA批 准用于多发性硬化症(MS)的治疗…，到目前为止 3．修饰条件的优化及修饰剂的选择 (1)反应时间对修饰反应的影响 rhIFN．口仍是唯一获FDA批准用于治疗MS的药物。 另外，rhlFN．0也可以用于上皮癌、肾癌、基底细胞 癌、乙型肝炎、丙型肝炎等疾病的治疗。与其它基因 工程类药物一样，由于缺乏天然蛋白质所具有的糖 振荡反应。分别于0．5、1、2、3、4小时取出0．5ml，用 基，rhlFN．口也具有半衰期短、具有一定的免疫原性、三硝基苯磺酸(TNBS)法“1测修饰率。琥珀酸琥珀 疏水性较强等特点，因此存在着进一步改善rhlFN．B 的临床治疗效果的需求。1977年Abuchowski等证 明：作为治疗药物，聚乙二醇(PEG，polyethylenegly— 茚三酮法”o测定NPC．mPEG的修饰率。 c01)修饰的蛋白质比未修饰的蛋白质更有效”J。目 (2)反应温度对修饰反应的影响 前，国内外已经尝试用PEG对多种蛋白质类药物进 行修饰，并取得了一定的进展，如腺苷脱氨酶、天冬 的比例加入CC。mPEG，混匀，分装于3支试管中，每 酰胺酶、粒细胞集落刺激因子、以及两种亚型*干扰 管lml，分别于4℃反应2小时、4。C反应1小时再 素的PEG修饰物已获美国FDA批准上市。我们用 25℃反应1小时、25‘c反应2小时，测定修饰率。sS． PEG对本实验室研制的rhlFN．13FⅪr17进行化学修饰， mPEG和NPC．mPEG以相同的方法进行测定。 优化修饰条件，并对修饰物的一般生物学特性进行 (3)溶液nH值对修饰反应的影响 检定。 材料与方法 置于5支试管中，调节pH值分别为7．0、7．4、8．0、 8．4、9．2。每支试管分别加入CC．In_PEG 6mg，4℃振 1．材料 荡反应2小时，用5NNaOH将各样品pH凋至9．2， 大肠杆菌表达的rhIFN．口ser。，为本实验室提供， 氰尿酰氯活化的单甲氧基聚乙二醇(-nPEG)、琥珀酸 行测定。 琥珀酰亚胺酯活化的mPEG、对硝基苯碳酸酯活化