p21基因在小鼠胚胎发育过程中的表达.pdfVIP

维普资讯 第27卷 第2期 吉首大学学报 (自然科学版) v01．27 No．2 2OO6年3月 JournalofJishouUniversity(NaturalScienceEdition) Mar． 文章编号：1007—2985(2006)02—0080—04 p21基因在小鼠胚胎发育过程中的表达 李 鹂 ，黄衡宇 ，谢永芳 (1．吉首大学生物资源与环境科学学院，湖南 吉首 416000；2．云南：大学生命科学学院， 云南 昆明 650091；3．重庆邮电学院生物信息学院，重庆 400065) 摘 要：以E9日龄至El4日龄 昆明种正常小鼠胚胎为材料，利用质粒扩增的、地i南辛标记的基因探针在组织切片上进 行DNA—mRNA分子原住杂交，研究了p2l基因在小鼠胚胎发育过程 中的表达．结果表明：p21基因从El0日开始参与小鼠 胚胎发育，其表迭特异性随着胚胎发育进程逐渐增强，与它在细胞周期 中的负调控作用相一致．D2l基因表达强度较稳定， 与其mRNA稳定有关． 关麓词：原位杂交；p2l基因；细胞周期调控；基因表达 中图分类号：Q343 文献标识码：A 小鼠的胚胎发育是一个极为特殊的分化过程，这个过程既包括细胞数 目的不断增殖，也包括细胞不断 地退出细胞周期，分化为具有不同功能的终末细胞．小鼠胚胎发育过程同样受着细胞周期的调控，而且可 以设想细胞周期调控基因在胚胎发育过程中的作用与离体细胞或一般体细胞中的作用是有差异的．一个 细胞可与其邻近细胞相互促进细胞分化和组织器官发生；分化成熟的细胞可产生抑素抑制邻近细胞发生 同样的分化，以防止器官组织的过度发育．目前已有不少实验证明细胞周期调控基因在胚胎发育过程中的 作用与在一般体细胞中的作用不同¨-2]．本研究以小鼠胚胎为实验材料，利用质粒扩增的、地高辛标记的 基因探针进行组织切片上的DNA—rnt~A分子原位杂交，有选择性地研究p21基因在胚胎发育过程中转 录(mP~A合成)水平上的表达变化，探讨小鼠胚胎发育的分子机制，为探讨 p21基因在胚胎发育中的可能 作用提供实验依据 ． 1 材料与方法 1．1材料 1．1．1胚胎 实验用昆明种小白鼠，购于中科院昆明动物所．成年雌鼠3O只和成年雄鼠10只，雌雄 (3：1) 合笼过夜．次 日早晨检查阴栓，见有阴栓 日以0日计算胚龄．分别于第9、第 lO、第 11、第 l2、第 l3、第 14日 取孕鼠断颈处死，立即取出鼠胚，进行石蜡切片的固定和包埋等处理． 1．1．2试剂来源 地高辛检测试剂盒、地高辛标记试剂盒均购 自德国BoehringerMannheim公司，p2l基因探 针重组质粒由美国冷泉港实验室Beach教授赠送，其他试剂和药品均为国产A．R级或进口分装． 1．2方法 1．2．1载玻片的预处理 按文献 [3]并稍加修改进行 洗衣粉浸泡，清水彻底清洗，烘干，1NHC1煮20min， * 收稿 日期 ：2006—02—09 基金项目：国家自然科学基金资助项目 作者简介：李 鹂(1973一)，女(苗族)，湖南省吉首市人 ，博士，吉首大学生物资源与环境科学学院讲师，主要从事细 胞及分子生物学研究 ． 维普资讯 第2期 李 鹂，等：p21基因在小鼠胚胎发育过程中的表达 8l 四蒸水洗至pH值为6．5，l80℃烘烤3h以上．恢复室温后，浸泡于体积分数为0．0l％的APES溶液(3一氨 丙基三乙氧基硅烷( Es)丙酮溶液)中l0s，丙酮清洗3次，新鲜的四蒸水冲洗 1次，空气干燥，4℃存放 备用． 1．2．2杂交前组织处理 以下各步骤直至杂交，所有的容器和称量勺、搅拌器等物品均在 160～180℃烤箱 内烤4h．配溶液的四蒸水经高压灭菌． 在旋转式石蜡切片机上切7tun厚组织切片，用甘油蛋白粘片剂贴在预处理的载玻片上，37℃温育 24h后，室温干燥备用．杂交前石蜡切片经二甲苯脱蜡2次，每次20m