清络通痹颗粒抑制滑膜成纤维细胞和单核细胞共培养诱生破骨样细胞分化的机制的研究.pdfVIP

清络通痹颗粒抑制滑膜成纤维细胞与单核细胞 共培养诱生破骨样细胞分化的机制研究 周学平 周玲玲 柳璋璞 刘天阳 陈 晨 周 聪 陆 燕 [摘要]目的：建立关节炎大鼠滑膜成纤维细胞和单核细胞共培养诱生破骨样细胞的方法，探讨 清络通痹颗粒抑制破骨样细胞分化、增殖的作用机制。方法：取佐剂性关节炎大鼠外周血单核细胞和 滑膜组织，将滑膜成纤维细胞和单核细胞共培养诱生破骨样细胞；制备清络通痹颗粒舍药血清，加入 共培养体系，观察其对破骨样细胞培养上清中M-CSF、IL-34、RANKL水平和破骨样细胞表达p-ERK的 影响。结果：关节炎大鼠滑膜成纤维细胞和外周血单核细胞共培养可诱生出破骨样细胞；清络通痹颗 粒3.6，7.2，14.4g·kg-1给药的大鼠含药血清可不同程度降低破骨样细胞培养上清中M-CSF、IL-34 和RANKL的水平，并可抑制破骨样细胞表达p-ERK。结论：清络通痹颗粒可能通过降低破骨细胞分 化的正调控因子M-CSF、IL-34和RANKL水平，进一步抑制ERK的磷酸化，从而抑制破骨细胞的分化、 增殖和活性。 [关键词]清络通痹颗粒;类风湿关节炎;破骨细胞;共培养;细胞因子 南京中医药大学，南京210046 ·96· 中华中医药学会第十六届全国风湿病学术大会论文集 的建立【．1参照文献，30只SD雄性大鼠，每只大裹1 QLT含药血清对破骨样细胞培养上清M-CSF水平 0．05 的影响i±sn=4 鼠右后足跖皮内注射CFA ml，另取10只大鼠 作为正常对照组，以等体积生理盐水同部位注射， 饲养28天。取新鲜抗凝血，分离、培养单核细胞。 大鼠处死后取关节滑膜组织，分离滑膜成纤维细 胞，培养后传代。 24孔板内加入106·ml。单核细胞，将传代至 3—5代的滑膜成纤维细胞制备成105·mlq细胞悬 注1)PO．05 液加入24孔培养板内的悬挂式Transwell小室内， 表1结果显示，QLT不同剂量给药的大鼠含药 加入1，25(OH)2D3(10一7mol·Lq)，置5％C02 血清可抑制共培养诱生破骨样细胞体系的培养上 培养箱37℃培养，培养3周后，进行抗酒石酸酸性 清液中M．CSF的水平，与对照组比较差异显著(P 磷酸酶(TRAP)染色鉴定，倒置显微镜下观察， 0．05)。 TRAP+部位呈棕红色颗粒。 2．3 QLT对破骨样细胞培养上清11-34水平的影 1．5 破骨样细胞培养上清细胞因子水平检测 响结果如表2所示，QLT不同剂量给药的大鼠含 5％CO：、370C单核细胞和滑膜成纤维细胞共培养1 药血清可抑制共培养诱生破骨样细胞体系的培养 周，加入l：10稀释不同剂量组的QLT含药血清和 上清液中IIJ斟的水平，与对照组比较差异显著(P 正常对照血清，培养48h，取出Transwell小室，收集 0．05，0．01)。 下层的上清液，ELISA法检测上清液中M—CSF、IL． 2．4 QLT对破骨样细胞培养上清RANKL水平的 34和RANKL的水平。 影响结果如表3所示，QLT不同剂量给药的大鼠 1．6破骨样细胞P．ERK表达检测5％C02、370C 含药血清可抑制共培养诱生破骨样细胞体系的培 单核细胞和滑膜成纤维细胞共培养1周，加入1：10